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研究了Ca Cl2溶液处理方法、长期保存的原始菌种活化次数、离心条件对感受态细胞最终转化效率的影响,并分析其最佳转化效率参数、优化感受态制备和转化方法。结果发现:使用过滤处理的Ca Cl2比灭菌处理的Ca Cl2制备的感受态细胞转化效率高。在其他条件相同的情况下,长期保存的大肠杆菌菌种活化3次以上的转化率最高;制备感受态细胞第1次离心在4℃、4 000 g条件下离心15 min,第2次离心时在4℃、4 000 g条件下离心5 min得到的感受态细胞转化率最高。 相似文献
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以小立碗藓作为试材,将总长为1 981bp的小立碗藓C3H基因分为上游片段(1 000bp),下游片段(981bp),并以此设计引物,得到上游臂(C3H1,735bp)、下游臂(C3H2,700bp)。在C3H1引物设计时引入XhoI、EcoRV酶切位点到两端,C3H2设计时引入NdeI、BamHI酶切位点到两端。以小立碗藓总DNA为模板,通过PCR扩增得到C3H1和C3H2片段。将C3H1和C3H2插入到pTN182载体中,获得敲除载体(C3H1-pTN182-C3H2质粒),通过PCR获得C3H1-nptⅡ?C3H2目的片段,并且采用单因素方法研究引物浓度与退火温度对PCR产物浓度及特异性的影响。结果表明:引物浓度为0.20μmol/L,退火温度为58.7℃,PCR产物特异性最高且产物浓度较高。 相似文献
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