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羊传染性脓疱病毒42K囊膜蛋白基因克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用特异性引物扩增羊传染性脓疱病毒42K囊膜蛋白基因,与不同的表达载体重组后用DIG标记的特异性DNA探针进行Dot-blotting和Southern blotting杂交检测,挑选出能稳定传代的重组菌9株。经IPTG诱导后,用光敏生物素标记抗囊膜蛋白IgG进行western blotting分析,检测到能高水平表达的重组菌pGEL-4A,每升培养液中所表达的病毒囊膜蛋白达560mg。 相似文献
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以阿尔冈金等6个地方主栽的紫花苜蓿品种为材料,对随机扩增多态性DNA标记(random amplified polymorphic DNA,RAPD)法鉴定不同紫花苜蓿品种的试验条件进行了优化。结果表明,使用改良的CTAB法提取紫花苜蓿基因组DNA蛋白较少,质量较高;PCR扩增反应体系中使用1 U/μL的TaqDNA聚合酶、10 ng/μL的DNA模板和300μmol/L的dNTP,扩增的条带较多,且较清晰,适宜于后续RAPD法鉴定;从100条10个碱基的随机引物中筛选出S37与S140两条引物,适用于6个不同苜蓿品种的鉴定。 相似文献
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利用非变性聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳技术,对8个野生紫花苜蓿品种过氧化物同工酶进行了分析,通过对各供试材料酶谱特征和相似系数的分析,探讨紫花苜蓿品种间的亲缘关系。结果表明,过氧化物同工酶在8个紫花苜蓿品种中均有表达,但各品种间的表达谱带及不同的同工酶表达量存有差异。8个品种共获得24条酶带,且存有1条共有表达酶条带,其中陇东野生紫花苜蓿同工酶谱带最多,表达有4条带;阿尔冈金酶谱带数最少,仅出现2条带。酶谱条带聚类分析表明,陇南野生紫花苜蓿与阿尔冈金间亲缘关系最远,亲缘关系呈现不同程度的差异。 相似文献
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当归[Angelica sinensis (Oliv.)Diels]是一种高原药用植物,亚高原区不能种植,本研究通过在亚高原区实验室常温下进行不同发育阶段当归的培养,观察其生长和通过实验室培养为研究提供材料的可行性,为当归的研究探索一种简易的供材途径。结果表明,春季培养中培育出生长良好的当归苗,结合冰箱-5℃冻储供苗,成功进行了冬、春2季的成药期培养,其中大苗当归早薹开花,但春季培养后期未抽薹当归在夏季高温下转入休眠;3a生成籽期当归的冬季培养顺利抽薹结籽。分析显示,培养的各发育阶段的当归叶片均可用于基因表达的检测。可见,依本试验的条件和方法可在亚高原实验室常温下进行包括育苗、成药生长及3a生成籽当归的开花结籽在内的绝大部分生命过程的培养,并可在1a的绝大部分时间进行培养,满足当归早薹开花基因表达调控等相关研究对试验材料的需求,此外观察显示,在亚高原高温下营养生长当归通过休眠逃匿夏季高温逆境。本研究很好地解决了亚高原低海拔区当归研究的供材问题。 相似文献
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光敏生物素标记IgG检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒囊膜蛋白及重组表达蛋白 总被引:1,自引:0,他引:1
用光敏生物素标记从兔抗羊接触传染性脓疱性皮炎病毒超免疫血清中提取纯化的IgG,把从蔗糖密度梯度离心纯化的病毒用2-ME和NP40裂解后与重组转化菌pGRL-4A和pGRH-3Ag一起进行SDS-PAGE,并进行转移电泳。对用光敏生物素标记的IgG进行Western-blotting印迹杂交检测。结果,检测到产生IgG的病毒囊膜蛋白有5条,分子量分别为125.0、96.0、83.0、56.3和42.0ku;检测到重组菌pGRL-4A和pGRH-3A可表达分泌其中的3条囊膜蛋白,其分子量分别为83.0、56.3和42.0ku;pGRL-4A的表达较强,对42.0ku蛋白的分泌量最高。所重组的病毒DNA Hind Ⅲ/A 片段中含有该病毒囊膜蛋白抗原基因。 相似文献
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