家蚕核型多角体病毒酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因核苷酸序列分析     

郭锡杰  金勇丰  杨明观  张耀洲 《蚕业科学》2002,28(2):109-114

从家蚕核型多角体病毒中国镇江株 (BmNPV ZJ)基因组DNA中克隆出酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因 (ptp) ,该基因的编码部分由 5 0 7个核苷酸组成 ,其中A为 16 3、C为 99、G为 113、T为 132 ,G +C含量约为 4 2 %。根据其核苷酸序列推演的蛋白质由 16 8个氨基酸残基组成 ,其中含有酪氨酸蛋白磷酸酯酶催化活性区的 11个氨基酸“HC”基序。该基因与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)ptp和BmNPV T3株 (日本 )的ptp核苷酸序列的同源性分别为 96 8%和 98 2 %。BmNPV ZJ酪氨酸蛋白磷酸酯酶 (BmNPV ZJPTPase)的氨基酸全序列与AcMNPV、BmNPV T3、芹菜夜蛾核型多角体病毒 (AfMNPV)PTPase和黄杉毒蛾核型多角体病毒 (OpMNPV)PTPase 1的氨基酸全序列的同源性分别为 97%、97 6 %、96 %和 6 0 % ,而与OpMNPVPTPase 2的同源性仅为 2 0 %。在NCBI数据库中查找BmNPV ZJPTPase的同源性序列 ,查找到的 5 99381个序列中发现至少有 14种mRNA加帽酶其N端部分存在PTPase催化活性区的“HC”基序 ,但其氨基酸全序列的同源性只有 31%～ 32 %。该基因序列已被GenBank数据库收录 ,登录号为AF316 871  相似文献   

柑桔越冬后叶片的光合动态     

陈志辉  金勇丰  马春娟  张良诚 《果树学报》1993,(2)

试验用便携式 CO_2红外分析仪对杭州地区温州蜜柑越冬后叶片光合动态进行了测定.结果表明越冬后叶片的净光合速率总趋势是上升,即有越冬后叶片的光合恢复现象.净光合以秋叶最大,夏叶次之,春叶最低.净光合和气温的变化动态有着明显的关系.在越冬后叶片的光合恢复过程中,叶片叶绿素含量提高,表观量子产量上升,而羧化效率几乎不变,表明越冬后叶片光合潜力的恢复主要取决于叶片对光能利用的改善.  相似文献   

人血小板因子Ⅳ在家蚕杆状病毒表达载体系统中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

于威  金勇丰  吴玉澄  张耀洲 《蚕业科学》2001,27(2):100-103

将人血小板因子Ⅳ (HumanPlateletFactorⅣ ,简称hPF4)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK PF4,并与线性化病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞 ,在细胞内发生同源重组 ,获得重组病毒BacPAK PF4。Southern杂交结果表明重组病毒基因组中含有hPF4基因。重组病毒以MOI=10感染家蚕培养细胞 (2× 10 6个细胞 )和家蚕 5龄幼虫 ,表达产物用体外培养的血管内皮细胞测定其生物活性 ,测得表达量在家蚕培养细胞中第 3天达到最高值为 6 0 88μg/ 2× 10 6个细胞 ;在蚕体内表达第 5天达到最高值 ,表达量明显高于家蚕培养细胞  相似文献   

多角体蛋白基因核苷酸序列对HBsAg(PreS2+S)在家蚕中表达的作用     

杨瑞丽  金勇丰  吴玉澄  张耀洲 《蚕业科学》2002,28(1):39-44

应用PCR突变的方法 ,在乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)前S2序列的 5’端融合了BmNPV多角体蛋白基因5’端的 12个碱基 ,获得了融合乙肝表面抗原中蛋白基因 (HBMp) ;通过同源重组将其插入到BmNPV基因组多角体启动子后 ,构建了重组杆状病毒BmPAK HBMp。用重组病毒BmPAK HBMp和BmPAK HBM(带有非融合乙肝表面抗原中蛋白基因 )感染家蚕细胞及蛹 ,对两种病毒的表达产物用ELISA进行了跟踪检测 ,结果表明融合蛋白比非融合蛋白HBsAg活性提高了 6 0 %～ 80 % ,作为HBsAg构成部分的PreS2抗原性提高了 8～ 10倍 ;并且HBsAg和PreS2 Ag表达的时相曲线不同 ,PreS2 Ag的表达量比HBsAg早 1～ 2d达到最大值。ELISA检测和Westernblotting分析表明 ,多角体基因序列的存在更有利于中蛋白全基因 (PreS2 +S)的表达。  相似文献   

人内皮抑素在家蚕细胞和幼虫中的表达     

朱振洪  金勇丰  张耀洲 《农业生物技术学报》2001,9(4):338-341

将人内皮抑素（Endostatin）基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中，获得重组转移载体pBacPAK-Endo，并与修饰性线性化病毒Bm-BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞，二者在细胞内发生内源重组，经蓝白斑筛选及DNA点杂交，鉴定出含有Endostatin基因的重组病毒BmBac-Endo。将重组病毒感染家蚕培养细胞和五龄幼虫，经SDS－PAGE电泳、Western blotting分析及对人血管内皮细胞株ECV304的抑制活性测定，证明Endostatin在家蚕细胞和幼虫中得到高效表达，且表达产物具有良好的生物学活性。  相似文献   

家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的原核表达、纯化及活性检测     

张苗  张耀洲  张文波  金勇丰  蓝航莲 《蚕业科学》2005,31(3):268-272

为进一步研究家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的功能和作用机理,利用RT-PCR技术,从家蚕总RNA中扩增到家蚕SCI-SB基因片段,构建了含有GST标签的融合表达质粒pGEX4T-1-SCI-SB。采用pGEX融合蛋白表达系统,在大肠杆菌BL21中得到以包涵体形式存在的重组GST融合蛋白质,表达量可占菌体蛋白的15%。将包涵体变性、复性处理以后,进一步利用GSTTrapFF亲合层析一步获得了重组蛋白。将该重组蛋白免疫新西兰纯种大白兔,获得效价高的多克隆抗体。胰凝乳蛋白酶活性抑制实验结果表明该重组蛋白具有一定的酶活抑制作用。  相似文献   

湖北海棠实时生树阶段转变过程中多胺,RNA／DNA和蛋白质含量的 …   总被引：2，自引：0，他引：2  

金勇丰  李载龙 《浙江农业学报》1998,10(5):264-267

本试验研究了湖北海棠成年实生树阶段转变过程中叶片内多胺,ＤＮＡ和ＲＮＡ含量以及可溶性蛋白质含量的变化。结果表明,随着实生树从童区向成年区的转为,叶片内源多胺总量,腐胺,精胺和尸胺含量下降,至成年区除尸胺外,其余变化趋于平稳;叶片中ＤＮＡ,可溶性蛋白质含量随叶片着生位置的上升而增加,ＲＮＡ含量和ＲＮＡ／ＤＮＡ值初始逐渐上升,至实生树２ｍ高度位置达到峰值后呈下降趋势,成年区叶片ＤＮＡ含量和ＲＮＡ含量均  相似文献   

桃早熟芽变品种‘大观一号’的RAPD分析及其特异片段的克隆     

金勇丰  张耀洲  陈大明  张上隆 《果树学报》1998,(2)

利用140个单个和混合随机引物对桃布日早生及其早熟芽变品种'大观一号'基因组DNA的多态性进行RAPD分析。其中有一个引物能检测出两者之间DNA的多态性，在1．1kb处'大观一号'多了一条特异性条带，将该片段克隆到pUC19载体，并作了酶谱分析。  相似文献   

家蚕Mod基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究     

周秋梅  金勇丰  张耀洲 《蚕业科学》2009,35(4)

已知多数含BTB/POZ结构域的锌指蛋白对生物体的发育、分化及染色体重组等具有重要的调节作用。从已构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条编码MOD(mdg4)蛋白的基因序列(GenBank登录号:DN237077)。该基因序列的ORF长1 080 bp,编码359个氨基酸残基,蛋白含有BTB保守结构域和FLYWCH保守结构域,与黑腹果蝇、冈比亚按蚊、赤拟谷盗和埃及伊蚊的MOD多序列比对,其同源性不超过40%。表达、纯化带有His标签的家蚕MOD蛋白(BmMOD),并用纯化的融合蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体。实时荧光定量PCR显示BmMod基因mRNA转录水平在家蚕蛾期及5龄幼虫的卵巢最高,推测BmMod基因在家蚕生殖腺发育过程中产生一定作用。利用纯化的BmMOD蛋白多克隆抗体进行Western blotting分析也表明该蛋白在家蚕蛾期及5龄幼虫卵巢中的表达量最高,验证了BmMod在家蚕生殖腺发育中的功能。亚细胞定位结果显示BmMOD蛋白几乎完全定位于家蚕卵巢上皮细胞(BmN)的细胞核中。  相似文献   

鸡肠道菌基因组DNA的RAPD分类的研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

吴天星  金勇丰  曹广力  张耀洲 《畜牧兽医学报》2002,33(3):247-249

本文以7种鸡肠道菌为研究对象，分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对其基因组进行DNA分析，筛选出一系列随机引物，能在7种肠道细菌中有较好的多态性，可用作分子标记鉴别这7种肠道菌。  相似文献