梨叶片原生质体制备方法的建立及其基因瞬时转化试验     

高成昱  王艺衡  靳江周  李涛  李金斗  周梦瑶  张海霞  马辉  张玉星  亓宝秀  许建锋 《园艺学报》2023,(5):1141-1150

以‘新梨7号’梨叶片为材料，探究影响原生质体分离的主要因素，制备高产优质的叶肉原生质体，并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶，0.1%果胶酶，0.4%离析酶，0.5 mol·L^-1甘露醇，20 mmol·L^-1 KCl,20 mmol·L^-1 MES,10 mmol·L^-1 CaCl2,1.0 g·L^-1 BSA)中酶解12 h，可制备出产量为1.09×10⁶ protopl·mL^-1、活力为90%的原生质体。将1～2μg·mL^-1 pROK2-GFP质粒DNA通过40%PEG-4000介导转化至上述原生质体中并培养12 h，可以观察到GFP绿色荧光信号，转化率可达40%。  相似文献