烟草丛顶病毒RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)介导的体外复制体系     

逯晓明  于成明  王国鲁  王德亚  耿国伟  刘珊珊  师科荣  原雪峰 《植物病理学报》2017,47(6):790-796

通过重叠PCR扩增得到烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)中国分离物RdRp的编码序列,构建以pMALC2X为基础载体的原核表达载体pMAL-TB-RdRp。0.5 mM IPTG诱导可特异性表达分子量约为120 kDa的MBP-RdRp融合蛋白。温度梯度实验显示,18℃下诱导表达的MBP-RdRp融合蛋白的可溶性比例较高,约17%;经亲和层析纯化的MBPRdRp可特异性识别TBTV正链和负链的3'末端序列,催化体外复制;对正负链的3'末端的体外复制效率存在差别,识别负链3'末端的体外复制效率明显高于正链3'末端。本研究创建的TBTV RdRp介导的体外复制体系为进一步研究TBTV基因组复制调控奠定了基础。  相似文献   

对小麦黄花叶病毒存在抗性差异的2种小麦品种中eIF4E序列分析     

耿国伟  顾珂  于成明  李向东  田延平  原雪峰 《植物病理学报》2017,47(4):568-572

正小麦黄花叶病于1927年在日本首次报道~([1]),其病原包括小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)和中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)。我国各省麦区在1980年以后陆续报道了其发生与危害,对小麦生长发育构成严重影响。WYMV属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大  相似文献   

融合海肾荧光素酶的重组病毒在移码和通读研究中的应用初探     

于成明  王国鲁  王德亚  师科荣  原雪峰 《植物病理学报》2016,46(6):846-849

<正>海肾荧光素酶(Renilla Luciferase,Rluc)可催化腔肠素(coelenterazine)氧化产生高能量中间产物,氧化过程同时发出蓝色生物荧光,最强荧光波长465 nm。鉴于荧光素酶生物发光的高灵敏度检测特性,由海肾荧光素酶和另一种萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase,Fluc)组成的单报告和双报告基因检测系统广泛应用于生命科学研究领域,如遗传毒性检测、信号通路研究和某些顺式作用元件的  相似文献   

松材线虫病早期诊断技术研究评述     

马跃  吕全  于成明  李琴  刘会香  张星耀 《山东农业大学学报(自然科学版)》2014,(1):158-160,76

早期诊断技术的应用是对松材线虫病这一重大森林生物灾害进行监测预警,进而防控该病害的重要举措。本文从发病症状、病原鉴定、化学生化、媒介昆虫、光谱学、电学、早期检测管等方面对目前松材线虫病早期诊断技术研究进展进行了总结评价,以期对未来更为简便、快速、准确的早期诊断方法的研究提供理论参考。  相似文献   

扑救特大森林火灾的通信联络组织与实施     

于成明  邵伟旭 《森林防火》1994,(2):42-43

扑救特大森林火灾的通信联络组织与实施于成明，邵伟旭，王伟（云南省森警支队）无线电通信联络是森警部队完成护林防火、战备执勤、处置突发事件等任务所采用的主要指挥工具。俗话说得好：“打火靠指挥．指挥靠通信”。各级指挥员对火场分析、判断、决策必须要有可靠的、...  相似文献   

山东省苹果树腐烂病菌不同分离株的生物学特性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

伦莹莹  于成明李 琴何邦令  刘会香 《落叶果树》2014,(3):30-33

  相似文献   

两种类型黄瓜花叶病毒卫星RNA的序列、结构以及对辅助病毒的致病性调控分析     

刘珊珊  于成明  曹欣然  耿国伟  李向东  师科荣  原雪峰 《植物病理学报》2018,48(3):365-372

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)卫星RNA(satellite RNA,satRNA)通常影响CMV的致病性。本研究设计了检测satCMV的简并引物,通过RT-PCR从山东省泰安市3种自然发病寄主中检测到satCMV,发现了两类长度有明显差异的satCMV:白菜与萝卜中克隆的satCMV为339个核苷酸,二者的核苷酸一致率为99.41%;烟草中克隆的satCMV为383个核苷酸,与白菜和萝卜中satCMV的核苷酸序列一致率均为71.06%。系统进化分析表明这两类长度有明显差异的satCMV亲缘关系较远。两种类型的satCMV与CMV-Fny混合接种对CMV致病症状的调控存在明显差异。利用m Fold软件分析了两类不同长度的CMV卫星RNA基因组及其互补链的RNA结构特征,表明两类sat CMV与CMV互作的活跃度以及核心结构域存在差异。两类satCMV全基因组的克隆以及结构分析为研究不同类型satCMV与CMV的互作及其对CMV致病性的影响奠定了基础。  相似文献   

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)S3和S10基因组非编码区对翻译的调控作用     

袁婷  王增辉  于成明  耿国伟  苏陈禹  原雪峰 《植物病理学报》2019,49(3):355-361

 水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus, RBSDV)基因组含有5′帽子,无3′poly(A)尾巴,且不同基因组片段的5′和3′末端序列均十分保守。本研究以RBSDV S3和S10为对象,分析其非编码区对翻译的调控作用。研究发现S3和S10的5′UTR在有无帽子时均可以正向调控报告基因Fluc的翻译,具备核糖体内部进入位点(IRES)活性,且5′末端的基因组保守序列及邻近序列与IRES活性密切相关;而对应的3′UTR则抑制5′UTR对翻译的正调控效应,其分子基础是5′UTR和3′UTR之间的RNA-RNA互作,且该互作也抑制帽子依赖型翻译的效率。这是首次关于有帽子植物RNA病毒中IRES元件的报道,研究结果对了解植物双链RNA病毒基因组非编码区对翻译的调控作用具有重要科学意义。  相似文献   

烟草丛顶病毒ORF1蛋白的多克隆抗体制备及应用     

王国鲁  王德亚  于成明  原雪峰 《植物病理学报》2016,46(1):63-71

PCR扩增烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)的ORF1序列并克隆到原核表达载体pEHISTEV中,转化大肠杆菌Rosetta菌株经IPTG诱导表达TBTV ORF1蛋白。利用切胶纯化的ORF1蛋白免疫新西兰大耳白兔制备并获得抗血清,间接ELISA检测效价为1:24 3000。经抗原亲和纯化从抗血清中得到特异性和灵敏度俱佳的ORF1多克隆抗体。Western blot分析显示,TBTV ORF1多克隆抗体既可以检测田间发病的烟草丛顶病样品中ORF1蛋白,也可检测在体内和体外翻译体系中的TBTV ORF1蛋白的表达。另外发现ORF2蛋白以ORF1延长蛋白的形式存在,根据ORF1和ORF2的重叠情况及潜在的七核苷酸滑动序列和下游的稳定二级结构,推测此ORF1延长蛋白是移码翻译产物。  相似文献   

2种类型的烟草扭脉病毒外壳蛋白基因的序列和结构分析     

张振甲  王德亚  于成明  王增辉  师科荣  李凡  原雪峰 《植物病理学报》2016,46(2):241-246

 烟草丛顶病主要由烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus ,TBTV)和烟草扭脉病毒(Tobacco vein distorting virus ,TVDV)复合侵染引起。其中,TVDV的CP蛋白可分别包装TBTV和TVDV形成病毒粒子;但也存在TVDV单独侵染不携带TBTV的病样。本文利用RT-PCR对自然状态下携带TBTV的TVDV(采自云南弥渡)和不携带TBTV的TVDV (采自云南保山)的cp基因进行序列克隆,发现TVDV弥渡分离物的cp基因为618个核苷酸,而TVDV保山分离物的cp基因为621个核苷酸,二者的核苷酸序列一致性为90.02 %,氨基酸序列一致性为89.81 %;而长度相同的TVDV cp基因序列一致性为98.5 % ~ 100 %。表明这2个cp基因属于2种不同类型。系统发育树分析也表明这2个cp基因属于进化距离较远的2个群。利用SWISS-MODEL进行同源建模,发现2种类型的TVDV CP蛋白的主要空间结构域基本一致,存在细小的结构域及结构域之间无规则卷曲角度的差异,整体空间结构没有发生明显改变。推断TVDV保山分离物CP蛋白中关键氨基酸的序列突变是导致CP无法包装TBTV,从而在病害传播过程中丢失TBTV的主要因素。  相似文献