菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白大小亚基的原核表达及其抗血清制备     

陈定虎  刘恭源  郑传发  管维  熊仁广  苏斐  王勇 《植物检疫》2016,(5):49-53

本研究对菜豆荚斑驳病毒大、小亚基编码的基因密码子进行了优化并人工合成了这两个基因,然后克隆到原核表达载体p ET-22b(+)中,通过转化大肠杆菌BL21(DE3)菌种并在IPTG的诱导下进行了成功表达,大亚基表达产物分子量为41 k D、小亚基表达产物分子量为22 k D,并制备出了大小亚基基因表达产物的抗血清。测试结果表明,优化后的CP的大、小亚基基因在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下,3 h后得到了成功的表达,制备的两种抗血清特异性强、效价都达到1∶3.2×10~4,可以对BPMV CP 3个不同的区域同时进行检测,提高了检测的准确度。  相似文献   

用毕赤酵母表达李属坏死环斑病毒外壳蛋白基因及表达产物抗血清的制备与研究     

陈定虎  刘恭源  杨雷亮  张博  王勇  张宪臣 《植物检疫》2013,(1):11-14

用RT-PCR的方法克隆李属坏死环斑病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到pGEM-T载体上,得到pGEM-T-PNRSV重组载体,然后将其克隆到真核表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母GS115菌株后,在甲醇的诱导下表达外壳蛋白,表达产物经过SDS-PAGE及Western-blot分析,结果表明该病毒的CP基因在毕赤酵母中得到了高效表达,回收表达蛋白并免疫家兔,获得PNRSV特异性抗血清共计40mL,经过间接酶联免疫吸附法测定其效价为3.2×104,本研究利用基因克隆的方法来制备PNRSV抗血清,完全避免了用该病毒的繁殖来制备抗血清而导致该病毒扩散蔓延的风险。  相似文献