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利用RK2的parDE片段提高重组质粒在生防菌成团泛菌中的稳定性 总被引:7,自引:0,他引:7
用PCR方法将广宿主范围质粒RK2中控制稳定性的片段parDE克隆到pGEM┐T载体上,然后插入到分泌表达载体pExSec1的BamHI切点上,得到两个新载体pZL2和pZL3,其中parDE的转录方向分别与T7启动子相同和相反。经酶切物理图谱分析和PCR扩增验证后,将pZL2和pZL3分别电击转化到成团泛菌308R中,在无抗生素的LB培养基中生长100代后仍100%地保留在细胞内。新质粒在植物叶面生长的细胞内也100%稳定 相似文献
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本文通过三亲交配将带有梨火疫欧文氏杆菌功能完整的hrp基因簇的重组粘粒pCPP430转移到了胡萝卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora) Se9R中。从接合子中提纯的质粒与pCPP430的大小、酶切图谱相同;以该质粒为模板,用针对hrpN序列的引物经PCR扩增得到与hrpN大小相同的片段;用地高辛标记的hrpN作为探针进行Southern blotting分析,在接合子中的质粒上得到预期的杂交带。接合子可以在烟草叶片上稳定地引起过敏反应。另外,接合子可以在寄主马铃薯叶片上引起过敏反应样枯斑,表明异源harpin的表达及功能不受软腐菌的抑制。该接合子在体外产生的果胶酸裂解酶活性与受体菌Se9R无明显差别。低浓度的接合子在马铃薯块茎上的软腐症状明显低于受体菌Se9R。外源harpin表达可能不改变软腐欧氏杆菌的致病力、而是通过诱导马铃薯抗性达到减轻发病的作用。 相似文献
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