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为探究稀释倍数对湖羊精液4℃保存的影响，本实验使用3只1～2岁体况良好的公羊，将采集的精液稀释2、5、10、15、20、25倍后，检测4℃保存过程中精子活率、活力、运动速率以及质膜完整性和顶体完整性。结果表明：保存3～5 d,10倍稀释保存的精子活率和活力显著高于其他各组；保存1～4 d,25倍高倍稀释的精子活力下降最快，且显著低于其他组；保存1～3 d,10倍稀释保存的精子曲线速率（VCL）和路径速率（VAP）显著高于20和25倍稀释组；保存期间，10倍稀释保存的精子质膜完整性最高，且在第4天显著高于其他组；保存3～5 d,5和10倍稀释保存的精子顶体完整性显著高于15～25倍稀释组。因此，在本实验条件下，5～10倍为湖羊精液4℃保存的最适宜稀释倍数，过低或者过高的稀释倍数都不利于湖羊精液4℃保存。 相似文献
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【目的】长江三角洲白山羊是我国及世界上唯一能生产优质笔料毛的山羊品种,课题组前期转录组测序结果表明：在优质笔料毛与非优质笔料毛个体皮肤组织中,MAP3K1的表达水平存在显著差异。探究优质笔料毛性状形成过程中与MAP3K1相互作用的关键miRNAs及其对山羊毛囊干细胞增殖和凋亡的影响,为长江三角洲白山羊的分子选育提供理论依据。【方法】通过生物信息学网站（StrBase、miRDB、TargetScan、miRWalk、DAVID、KEGG、RNAhybrid）预测、筛选与MAP3K1具有靶向关系的miRNAs,利用在线网站Venny 2.1绘制韦恩图。通过构建miR-31-5p过表达载体,MAP3K1、RASA1野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体,验证miR-31-5p与MAP3K1、RASA1之间的靶向关系,并结合qPCR和Western Blot技术检测过表达后miR-31-5p对MAP3K1、RASA1 mRNA和蛋白表达水平的影响。为探究过表达miR-31-5p后对细胞增殖、凋亡的影响,分析了转染miR-31-5p后毛囊干细胞内增殖相关基因（PCNA, CDK1, CCND2）、抗凋亡基因（Bcl-2）和促凋亡基因（Bax）的mRNA和蛋白表达水平;同时结合CCK-8,EdU,流式细胞术等方法验证过表达miR-31-5p对毛囊干细胞活力、细胞周期以及凋亡的影响。【结果】通过数据库共同预测到3个可能与MAP3K1相作用的miRNAs,结合现有miRNAs在皮肤和毛囊细胞上研究,最终选用评分相对较高的miR-31-5p作为研究对象。转染miR-31-5p后检测细胞内的miR-31-5p的相对表达量,发现miR-31-5p表达含量极显著高于对照组及空白载体组（P<0.01）;双荧光素酶报告基因结果显示过表达miR-31-5p可促使MAP3K1活性升高（P<0.01）,结合TargetScan、KEGG数据库预测发现miR-31-5p可靶向MAPK信号通路中位于MAP3K1的上游抑制因子RASA1。过表达miR-31-5p抑制了RASA1的活性（P<0.01）;同时,qPCR及Western Blot表明：过表达miR-31-5p后显著抑制RASA1的mRNA和蛋白表达,促进了MAP3K1的表达（P<0.01）。CCK-8结果显示过表达miR-31-5p后提高了细胞增殖能力（P<0.01）,通过EdU染色发现过表达miR-31-5p后,EdU阳性细胞率显著高于空白组（P<0.01）,促进细胞增殖;细胞周期数据说明过表达miR-31-5p后, G1/G0期细胞所占比例为52.23%,显著低于Control组（56.81%,P<0.01）,减缓了G1/G0期细胞阻滞,而S期和G2/M期差异不显著,但仍有上升趋势。通过细胞凋亡试验发现过表达miR-31-5p组活细胞率为93.8%,总凋亡率为4.9%,而空白组活细胞率仅为90.1%,总凋亡率为8.41%,说明在过表达miR-31-5p后细胞凋亡率明显下降（P<0.05）;最后检测miR-31-5p对增殖和凋亡相关基因的影响,发现过表达miR-31-5p后显著提高了增殖相关基因、抗凋亡基因（Bcl-2）的mRNA和蛋白表达水平（P<0.05）,降低了促凋亡基因（Bax）的mRNA和蛋白表达水平。最终根据所研究出的结果绘制miR-31-5p在毛囊干细胞中的分子作用机制图。【结论】 miR-31-5p通过靶向抑制MAPK信号通路中的RASA1,上调MAP3K1表达水平,进而促进毛囊干细胞增殖并抑制其凋亡,为进一步阐明调控长江三角洲白山羊优质笔料毛性状的分子形成机制提供理论依据。 相似文献
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为探究安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响,本实验采集3只1～2岁健康成年湖羊精液,混匀后取5份等量精液,按1:9的比例加入不同安石榴甙浓度（0、5、15、30、45μmol/L安石榴甙）的稀释液,4℃保存7 d。检测精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）含量、丙二醛（MDA）含量、过氧化氢酶（CAT）活性等指标。结果显示：保存4～7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子活率、活力显著高于其他各组;保存2～7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子质膜完整率、顶体完整率显著高于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子的MMP显著高于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组精子ROS含量显著低于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液MDA含量显著低于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液CAT活性显著高于其他各组。本研究结果表明,在稀释液中添加30μmol/L安石榴甙可以显著提高精液保存质量。 相似文献
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