正交优化设计蒙药阿给ISSR-PCR反应体系     

王真  刘越  孙辉  游光霞  孙洪波  申刚义  黄雪涛  毛珂  段福宇  谢龙生  蒋武霖  冯金朝  黄璐琦 《安徽农业科学》2010,38(15):7779-7781

[目的]建立适用于蒙药阿给（Artemisia frigidaWilld.）的ISSR反应体系,为ISSR标记技术在蒙药阿给遗传多样性研究中的应用奠定技术基础。[方法]利用正交试验设计,从Mg^2＋、dNTP、TaqDNA聚合酶和引物浓度4因素3水平,对蒙药阿给ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对PCR的循环次数及退火温度进行试验。[结果]在20μl反应体系中,Mg^2＋为1.5mmol/L,dNTP为0.25mmol/L,TaqDNA聚合酶为1.5U,引物为0.75μmol/L时,且ISSR最适的循环次数为40,最适退火温度为56.0℃,扩增效果最好。[结论]筛选出的反应体系适用于蒙药阿给的ISSR扩增。  相似文献