猪腹泻大肠杆菌LTa(R210G)和LTb原核表达及其在小鼠的免疫反应     

袁秀芳  王一成  徐丽华  刘邓  牛登元  王朝文 《华北农学报》2009,24(Z1)

大肠杆菌不耐热性肠毒素(LT)具有免疫增强作用,是良好的免疫佐剂.为了更好的研究其免疫增强效果,本研究将LT的两个亚基LTa(R210G)和LTb克隆到pGST中,原核表达ETa(R210G)和LTb,经Western-blotting分析,表达蛋白具有免疫原性.对表达蛋白进行大量纯化后,以卵清蛋白为模式蛋白(OVA)为模式蛋白,免疫小鼠,ELISA结果表明,OVA+LTa(R210G)佐剂组小鼠的抗体滴度最高,OVA+LTb和OVA+LTa+LT组抗体滴度相似,高于OVA+氢氧化铝组,而OVA+氢氧化铝组高于无佐剂OVA组.因此,LTa(R210G)和LTb具有良好的免疫增强作用,是一种极有希望的免疫佐剂.  相似文献   

加压软管灌配套技术     

高安丽  王一成  王三生 《农村科技》2005,(7):14-15

我团棉花滴灌最早是1999年引进以色列加压滴灌技术开始，虽然加压滴灌、随水施肥能够很好地解决棉花在各个生育期内对水肥条件的要求，有效地解决作物营养诊断、土壤养分诊断和调节水肥能力，及时供应作物需要的各种营养元素和水分，起到了增产的作用。但一次性投入成本过大，职工收入受到了影响，不被群众接受。从2002—2003年开始“小白龙”自压软管灌试验和推广，虽然节约了成本，但由于自压软管灌是靠自身压力灌水，所以渠道水位与条田必须达到一定的高差，如果渠道不进行防渗又易造成渗漏，引起地下水位上升，压力无保障，  相似文献   

重组猪干扰素-α单克隆抗体的制备和鉴定     

周晓丽  袁秀芳  杜晓莉  李军星  徐丽华  王一成 《浙江农业学报》2015,(3):332-337

利用自动发酵罐培养毕赤酵母,甲醇诱导其分泌表达重组猪IFN-α(r Po IFN-α);经硫酸铵沉淀、G-25琼脂糖柱脱盐处理及阴离子交换柱和分子筛层析纯化。以纯化r Po IFN-α蛋白作为抗原免疫6周龄BALB/c鼠3次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选和3~5次亚克隆,共获得5株均能稳定分泌抗r Po IFN-α单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类鉴定、特异性和叠加试验结果表明,这5株抗体均属于Ig G1亚类,能与r Po IFN-α产生特异性反应,其抗原结合位点相同或相近。该研究有助于进一步推动r Po IFN-α单克隆抗体在猪免疫学以及猪疫病诊断中的应用。  相似文献   

徐州地区牛、马血浆二氧化碳结合力的测定     

王晨  刘俊  赵继梅  张旭明  王一成  张雪良 《浙江畜牧兽医》1982,(3)

血浆二氧化碳结合力(CO_2CP)是反映血液碱储的重要指标。健康家畜因其体内存在正常的缓冲体系,血浆CO_2CP可维持在正常恒定的范围之内。如果机体因代谢紊乱等原因造成碱储的增减或因呼吸异常而造成碳酸的增减都可使平衡失调,引起酸中毒或碱中毒,从而导致血浆CO_2CP的改变。临床上,许多疾病的后期往往导致酸碱平衡的紊乱。因此,测定家畜血浆CO_2CP的正常指标,为诊治疾病及判断预后,提供可靠  相似文献   

规模猪场猪丹毒的诊治   总被引：1，自引：0，他引：1  

毛江昌  李军星  袁秀芳  徐丽华  曹会敏  王一成 《浙江农业科学》2012,(9):1315-1318

近年来浙江省部分规模猪场发生急性猪丹毒,给养猪场带来巨大损失。通过对临床上疑似发病猪进行细菌分离和PCR检测、序列分析鉴定,判定为猪丹毒杆菌;同时经过药敏试验,证实头孢噻肟、头孢曲松钠、多西环素、头孢唑啉等对猪丹毒杆菌有效。  相似文献   

弓形虫诊断抗原的亲和层析纯化和分析     

周永学  王一成  逄春泰 《浙江农业学报》1999,11(3):148-150

应用琼脂糖凝胶Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析分离弓形虫速殖子细胞质抗原和弓形虫速殖子膜抗原,分别获得亲抗体Ｐｓ和亲抗体Ｐｍ。经双多抗酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）夹心法测定,结果表明,Ｐｓ的最低检出量为１３．３μｇ／ｍｌ,亲抗体Ｐｓ为１．５μｇ／ｍｌ,Ｐｍ为４．４μｇ／ｍｌ,其中又以亲抗体Ｐｍ为最优。  相似文献   

产肠毒素大肠杆菌K88黏附素蛋白亚基Fae G在L.lactis中的表达及其抗原性     

刘淑杰  李永明  徐子伟  王一成 《中国兽医学报》2009,29(11)

在构建L.lactis表达载体pNZ8148-fae G的基础上,将该载体转化到L.lactis NZ9000中,重组菌经5 μg/Lnisin诱导3 h,SDS-PAGE结果显示,FaeG在L.lactis中表达的目的蛋白相对分子质量大小约为27 000,表达产物的量达菌体可溶性总蛋白的10.89%.Western blot分析结果表明,该目的蛋白具有良好反应原性.将重组L.lactis口服免疫BALB/c小鼠,小鼠产生特异性IgG及黏膜slgA.本试验为进一步研究仔猪口服重组L.lactis疫苗,诱导其产生抗ETEC K88黏膜免疫的同时,发挥L.lactis的益生功能,预防仔猪腹泻奠定了基础.  相似文献   

PRRSV浙江株ORF5基因的原核表达与免疫原性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

牛登元  王一成  袁秀芳  徐丽华  刘邓  伏小平 《浙江农业学报》2009,21(2)

根据GenBank中公布的PRRSV基因序列(EU709837),设计一对PCR引物,以浙江分离株为模板,通过RT-PCR扩增出ORF5基因全序列.以PCR技术构建了缺失信号肽及三处跨膜区的重组ORF5基因,命名为g-ORF5.将g-ORF5基因定向克隆到原核表达载体pET-28a中,转化入E.coli菌株BL21.经酶切和测序鉴定后,阳性菌株用1 mol/L IPTG诱导表达,用Ni-NTA纯化表达的重组蛋白.结果表明,重组GP5蛋白在大肠杆菌中获得表达.纯化后经ELISA和Dot-ELISA分析,表达蛋白具有免疫反应性,能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应.  相似文献   

鸭禽流感抗体血凝抑制试验(HI)的适用性改进     

张存  王一成  孙小梅  俞元明  袁秀芳  叶伟成  刘蔓雯 《浙江农业科学》2010,1(2):403-405

为解决鸡红细胞在检测鸭禽流感HI抗体时非特异性凝集的问题,开展抗原对鸡红细胞(CRBC)、樱桃谷鸭红细胞(yDRBC)、麻鸭红细胞(sDRBC)和番鸭红细胞(mDRBC)凝集特性,不同禽种间血清和红细胞的交叉凝集特性,血清中红细胞受体破坏酶(RDE)处理等一系列试验。结果表明,H5亚型AIV标准抗原对4种家禽的红细胞凝集效价完全一致,使用yDRBC检测樱桃谷鸭、麻鸭和番鸭血清的AIVHI抗体,和RDE处理后的血清比较,抗体效价符合率分别为100%、80%和100%。以yDRBC代替CRBC检测鸭血清AIVHI抗体的改进方法,检测结果具有更高的准确性和一致性,且方便适用。  相似文献   

重组NP蛋白抗原检测SIV抗体间接ELISA方法的建立     

王方昆  袁秀芳  刘思当  张存  徐丽华  王一成 《浙江农业学报》2008,20(6):0

用纯化的H9N2亚型猪流感可溶重组NP蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流感抗体的间接ELISA方法.ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为12.5 μg/mL,37℃ 1 h,4 ℃过夜;血清稀释度为1∶40;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37 ℃温育40 min,底物显色37 ℃ 15 min.经重复性试验、交叉试验、竞争抑制试验等试验,结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好.利用TG-ROC软件确定了自制ELISA(NP-ELISA)酶标板的临界值为0.20,特异性和敏感性分别为95.83和91.43.与美国IDEXX试剂盒相比较,符合率为94.00,无显著性差异.用已建立的ELISA方法检测临床血清样本356份,总阳性率为35.40.  相似文献