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将沙门氏菌鞭毛素和弓形虫免疫优势表面抗原1(SAG1)融合表达,研究其在小鼠上激发的体液免疫应答.首先,采用PCR扩增SAG1片段.其次,将SAG1连接到原核表达载体pET-28a中构建表达质粒pET-28a-SAG1;连接到实验室已有的pET-28a鞭毛素质粒中构建表达质粒pET-28a-F-SAG1;质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中并进行表达.将纯化后的蛋白免疫小鼠,每隔2周免疫一次,共免疫3次,第3次免疫后15 d取小鼠血清.最后,采用蛋白印迹检测蛋白的大小;用酶联免疫吸附方法检测血清中多克隆抗体的效价.结果表明,诱导出的SAG1蛋白大小为30 ku,F-SAG1大小为70 ku.酶联免疫吸附方法检测的D450 nm均为阴性对照的两倍,表明该多克隆抗体具有较高效价.可见,鞭毛素可以作为分子佐剂促进弓形虫亚单位疫苗的体液免疫应答. 相似文献
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为了研究分子佐剂Ov-ASP-1对弓形虫表面抗原糖蛋白1(SAG1)核酸疫苗的免疫效力的影响,用含有分子佐剂Ov-ASP-1的pVAX1-Ov-ASP-1-SAG1质粒、对照质粒pVAX1-SAG1、空载体pVAX1免疫鸡,并设置PBS对照组,通过抗体水平与细胞因子水平的检测结果判断免疫效果和免疫应答情况;然后用弓形虫RH株人工感染试验鸡,通过实时荧光定量PCR检测鸡的肺脏、脾脏、肝脏中的弓形虫数量,判断分子佐剂Ov-ASP-1是否增强鸡对弓形虫的抵抗力。结果表明:与其他组相比,试验各阶段pVAX1-Ov-ASP-1-SAG1组免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)和干扰素γ(IFN-γ)水平都较高,差异达到了显著或极显著水平(P0.05或P0.01);攻虫后pVAX1-Ov-ASP-1-SAG1组感染弓形虫的鸡荷虫量比其他组极显著降低(P0.01)。说明分子佐剂Ov-ASP-1可以显著增强弓形虫表面膜蛋白SAG1的免疫原性和免疫保护性。 相似文献
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将60头试验猪随机分为2组,每组3个重复,每个重复10头猪;对照组和试验组分别饲喂基础日粮和添加0.2%复方陈皮粉的日粮,共计60 d;饲喂过程中定期采集新鲜粪便,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)和末端限制性内切酶片段长度多态性(T-RFLP)指纹图谱技术研究饲喂复方陈皮粉对猪胃肠道菌群多样性的影响.结果表明,试验期间试验组的猪基本不腹泻,对照组有部分猪经常腹泻.分别对两组粪便样品的胃肠道微生物进行16S rDNA V3区扩增,再通过DGGE技术进行条带分离,DGGE图谱显示,猪胃肠道菌群物种丰富,两组样品之间存在明显的条带差异.对两组粪便样品胃肠道微生物16S rDNA全长进行扩增,用MspⅠ和HaeⅢ对扩增产物进行限制性酶切,再运用T-RFLP技术检测.通过RDP数据库查询比对,在两组粪便样品中,相同的T-RFs片段有27个,相对于试验组,对照组样品中差异部分片段对应的菌种多为致病菌.研究结果表明,临床上使用复方陈皮粉能有效预防猪腹泻等胃肠道疾病,这可能与药物能改善胃肠道微生态坏境,调节菌群平衡有关. 相似文献
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为探究福建省蛇蛔虫的分子生物学分类及种群遗传关系,在原临床诊断、病理组织学研究基础上,对送检分离的蛇蛔虫进一步使用引物对线粒体细胞色素氧化酶C-I区片段(cox1)进行扩增分析,并与NCBI登录的物种数据进行比对。结果显示,源自福建省的蛇蛔虫在分子生物学上与蛇丝状蛔虫(Ophidascaris filaria)、狮弓首蛔虫、鸡蛔虫等具有较高的同源相似性,同源性在90%以上,其中与蛇丝状蛔虫同源性最高为99.1%。本次对福建省蛇蛔虫分子生物鉴定的研究,为了解蛇蛔虫的生物分子遗传演化以及开展蛇蛔虫病临床防控提供了重要参考。 相似文献
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免疫映射蛋白1(IMP1)是一种从巨型艾美耳球虫中发现的蛋白,具有良好的免疫原性和免疫保护性.本试验通过Em IMP1基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备,为后续深入研究该蛋白的生物学及免疫学功能奠定基础.首先,从未孢子化的巨型艾美耳球虫新疆株卵囊中提取总RNA,反转录合成c DNA,PCR扩增Em IMP1基因片段.其次,将Em IMP1基因扩增片段连接到原核表达载体p ET-28a构建表达质粒p ET-28a-Em IMP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株并进行表达;将纯化后的蛋白与等量弗氏佐剂乳化后皮下注射至2只新西兰大白兔体内,每隔2周免疫一次,一共免疫4次后取得的兔血清即为多克隆抗体.最后,用所获得的多克隆抗体,对纯化后的Em IMP1进行免疫印迹试验鉴定,用酶联免疫吸附测定法检测多克隆抗体的效价.结果表明,克隆出的Em IMP1基因的全长为1 140 bp,诱导出的蛋白大小为70 ku,且该蛋白在上清液和包涵体中均有存在.免疫印迹试验检测结果显示,用上述方法制备的多克隆抗体具有良好的特异性,酶联免疫吸附测定法检测结果表明该多克隆抗体具有高效价.因此,可通过原核表达蛋白Em IMP1免疫兔子制备特异性好且效价高的多克隆抗体. 相似文献
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为确诊一例七彩山鸡疑似感染寄生虫死亡的原因,使用剖检、光镜形态学检测、HE病理染色观察等方法进行了临床诊断,使用PCR技术对获得的虫体18S rRNA进行扩增,鉴定感染虫体类型。剖检发现,病禽肠道黏膜内有细长白条状的线虫体寄生,感染数量较多,肝、心等部位未见明显病变;形态学检测发现,该线虫具有较为典型的尾刺结构。结合剖检症状和形态学鉴定,初步判断病禽感染的消化道线虫为异刺线虫。病理组织学检查发现,虫体寄生的肠道黏膜出现损伤及炎性症状;分子生物学鉴定发现,该线虫18S rRNA的PCR扩增条带大小为760 bp,同源性与鸡异刺线虫(DQ503462.1)最接近。经综合诊断,判定异刺线虫感染是导致本次七彩山鸡死亡的主要原因。本次分析鉴定的虫株与家禽源异刺线虫同源性较高,表明七彩山鸡感染的异刺线虫可能来自鸡等普通家禽。这提示,散养特种禽应定期驱虫,加强禽舍卫生清扫,尽量避免与普通家禽混养。 相似文献
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