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植物乳杆菌野生质粒分析及其提取方法的优化 《畜牧与饲料科学》2018,39(11):6-9
乳酸菌质粒提取研究具有很长的历史。目前已有多个有效的乳酸菌质粒提取方法被报道，其中多数以乳酸球菌为研究对象，而植物乳杆菌质粒提取有效方法报道较少。该研究以植物乳杆菌为研究对象，通过对比分析并优化已报道的乳酸菌质粒提取方法，得到了高效且适于平台期植物乳杆菌野生质粒的提取方法。通过该方法进一步分析了植物乳杆菌野生质粒数和高拷贝质粒，为后续构建植物乳杆菌表达系统所需供体质粒和受体菌株提供了重要依据。 相似文献
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在利用复合菌添加剂提高青贮品质和营养价值的研究中, 首先需要确定菌株间的拮抗特性, 以便获得最佳组合效果。利用传统的1/2组合菌饼法和牛津杯法检测了6种微生物间的拮抗特性。结果显示, 仅产朊假丝酵母菌和黑曲霉菌之间存在弱拮抗现象。在后续全组合液滴法检测中不仅观察到了以上拮抗现象, 还检测到了枯草芽孢杆菌与产朊假丝酵母菌, 以及绿色木霉菌与黑曲霉菌之间的拮抗现象。通过显微镜观察绿色木霉菌与黑曲霉菌之间的接触区域, 进一步证实了拮抗现象的存在。在所用的6种微生物中, 乳酸菌与其他受试菌无明显拮抗, 能够与其他微生物进行复配。产朊假丝酵母菌与枯草芽孢杆菌和黑曲霉菌存在拮抗, 因此, 可与乳酸菌和绿色木霉菌进行组合发酵。同样, 枯草芽孢杆菌和黑曲霉菌可单独与乳酸菌进行组合使用。综上表明, 与传统的1/2组合菌饼法和牛津杯法相比, 全组合液滴法具有操作简便、接触充分、不易污染和结果全面等优点。 相似文献
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纤维素酶在畜牧业、饲料工业、生物技术和生物能源利用方面均有广泛应用。纤维素酶基因工程作为研究的重点,可以提高酶产量和稳定性,具有广阔的应用前景。通过利用基因工程技术改造pMG36e载体,成功构建出具有双筛选标记的外分泌表达纤维素酶的食品级重组质粒,完成载体构建;然后将该质粒转化到粪肠球菌19855株并实现基因表达,经测定,分泌的纤维素酶活力为0.92 U/mL。该研究结果为后续食品级工程菌的进一步研制奠定了基础。 相似文献
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消化道菌群多样性对于维持家畜机体健康起着至关重要的作用,因此,对家畜消化道中定植菌群的种类和功能进行分析就显得尤为关键。由于所有动物的消化道是厌氧环境,所以在体外的好氧环境中,有些菌种不易培养,而这些菌种信息的缺失,会导致消化道优势菌群的分析结果出现偏差。借助一些广泛应用的分子生物学研究方法,可以避免这种情况的发生。这些方法主要是测序法和定性定量分析法。测序法包括指纹图谱法和高通量测序法,定性定量分析法包括荧光原位杂交法和实时荧光定量PCR法。这些方法均基于分子生物学水平,可避免菌体培养步骤,直接分析消化道菌群的组成和功能。综述了上述方法的原理以及各自的优点和缺点,并对它们在动物消化道菌群多样性分析中的应用进行了讨论,以期为研究动物消化道微生物时不同分子生物学方法的选择和联合使用提供参考。 相似文献
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富含蛋氨酸醇溶蛋白在产朊假丝酵母中的表达研究 《畜牧与饲料科学》2018,39(11):16-23
为构建表达富含蛋氨酸醇溶蛋白的产朊假丝酵母工程菌株,利用基因工程技术,将玉米δ—10kD-醇溶蛋白基因（zein）,酵母的GAP启动子（GAP—P）、终止子（GAP—t）拼接合成表达框,以18S rDNA片段为整合介导区．用放线菌酮（CYH）抗性基因作为筛选标记,结合pBR322质粒构建了同源整合表达载体．把zein基因同源重组整合到产朊假丝酵母染色体上,构建表达zein基因的产朊假丝酵母工程菌株。蛋氨酸含量测定结果显示,重组菌株的蛋氨酸表达量比起始菌株提高了17．14％。该产朊假丝酵母工程菌的构建为下一步提高其蛋氨酸产量的研究和应用打下了良好的基础。 相似文献
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食品级重组产朊假丝酵母菌的构建及其遗传稳定性测定 《畜牧与饲料科学》2018,39(12):6-12
旨在构建食品级酵母工程菌株,并对其遗传稳定性进行评价。采用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)方法,将实验室已构建完成的原核表达载体PGZM18中的原核基因序列删除,设计2组引物,以PGZM18原核载体序列为模板进行引物设计,将片段序列分为2个片段P1-1和P2-1,通过重叠延伸PCR技术删除来自原核的DNA序列(包括抗药性标记Amp在内的细菌质粒序列DNA片段及原核复制区),将最终获得的PCR产物GZM18转化至产朊假丝酵母中,通过菌落计数和PCR方法测定外源基因遗传稳定性。结果表明,食品级产朊假丝酵母工程菌株构建成功,外源基因具有较高的遗传稳定性。研究结果为产朊假丝酵母工程菌在微生物饲料开发方面的应用提供了科学依据。 相似文献
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利用绿色荧光蛋白报告基因筛选植物乳杆菌强启动子 《畜牧与饲料科学》2021,42(5):6-11
[目的] 结合已知植物乳杆菌启动子和绿色荧光蛋白报告基因,筛选能够进行稳定强表达的启动子,为构建植物乳杆菌高效特异表达载体提供基因元件。[方法] 分别合成已知植物乳杆菌启动子P11、Pefp、Ptuf33和Ptuf34及其下游绿色荧光蛋白报告基因,并使用上述合成序列分别替代pMG36e乳酸菌表达载体原有多克隆位点及其上游启动子部分,形成启动子筛选载体。利用电转方法将成功构建的启动子筛选载体转化至植物乳杆菌,通过检测重组子绿色荧光信号强弱对比分析启动子强弱特性。[结果] 4个启动子中转录延伸因子TU基因启动子Ptuf33和Ptuf34在受体植物乳杆菌中表达目的基因水平显著（P<0.05）高于其他启动子。[结论] 结合该研究结果及相关报道可知,启动子Ptuf33和Ptuf34在植物乳杆菌中普遍高表达,可以为后续高表达植物乳杆菌载体构建提供元件。 相似文献
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