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试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L-1,16 ℃,220 r·min-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-ChPrnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。 相似文献
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三江县根据市场需要,从本县实际情况出发,改变了过去只重视油茶、杉木,林木生长周期性长、见效慢的不合理现状,今年着手调整林种结构,把全县林业工作重点转移到发展经济效益好、见效快的水果、竹子上来,因地制宜的发展一批名、特、优果树林;大种沙田柚、板栗、白果、红枣、月柿和楠竹等。去年已种白果、板栗、柿子共16783亩。今年计划全县种植水果15000亩, 相似文献
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发病情况2004年5月河北省灵寿县南宅乡李某养鸡3000羽,在20日龄出现发呆,毛逆立无光泽,拉白灰色稀粪,采食量下降,李某曾用过硫酸庆大霉素或病毒唑,1日发病20~30只,来我处就诊. 相似文献