T7 RNA多聚酶基因的克隆、序列测定及其在E.coli中的表达     

余兴龙  涂长春  徐兴然  张茂林  张青婵  李作生 《中国兽医学报》2003,23(5):452-454

从BL21(DE3)E．coli菌株中以PCR的方法扩增得到了与T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase，T7pol)基因大小一致的DNA片断。将PCR产物纯化后直接克隆到pGEM—T载体中，经酶切鉴定和DNA序列分析表明克隆得到了正确的T7pol基因。将T7pol基因亚克隆入pET-28b( )中，构建得到原核表达质粒pET28T7。该质粒的BL21(DE3)pLysS转化菌在IPTG的诱导下可表达约98800的蛋白，这与T7pol的相对分子质量一致。将该质粒转化DH5α、JMl09、HBl01、BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS等5种不同的宿主菌，仅有转化T7pol酶活性受到抑制的宿主菌BL21(DE3)pLysS才能得到转化子，而其余4种T7T7pol酶活性不受抑制的E．coli宿主菌不能得到转化子。pET28T7原核表达质粒这种仅能在T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的T7pol基因能正确表达出具有RNA转录酶活性的蛋白。  相似文献   

CSFV囊膜蛋白E2单克隆抗体识别表(拟)位基序的差异性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张富强  李志华  张念祖 《中国预防兽医学报》2005,27(5):373-379

CSFV囊膜糖蛋白E2是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白.本研究应用抗CSFV(Alfort毒株)E2蛋白的单克隆抗体c2410、WH303及M1669,筛选噬菌体展示的12肽随机肽库,进行表位分析.结果发现:c2410、WH303针对同一线性表位,精确定位于E2蛋白的832～837位氨基酸SPTTLR,是CSFV特异性表位.同时发现WH303识别的2个主要拟位基序:(W)NKPxT、AxWPTA,M1669识别的3个主要拟位基序:DxMRLD、(SL)MPPF、MLLHxxPxL,但在E2蛋白中均未查找到与之相同(似)序列.应用ELISA、竞争性ELISA、免疫印迹分析不同表(拟)位对单克隆抗体的免疫反应性差异,结果发现:(1)c2410对WH303的3个噬菌体拟位(WNKPxT,AxWPxATA,SPSxLR)在ELISA、免疫印迹检测中均为阴性;(2)SPTxLR噬菌体拟位能与c2410、WH303发生特异性结合,且此结合能被病毒抗原阻断;(3)M1669的3个噬菌体拟位(DxMRLD,(SL)MPPF、MLLHxxPxL)在ELISA、免疫印迹中能与M1669发生特异性结合,但此结合不能被病毒抗原阻断.  相似文献   

犬细小病毒核酸疫苗制备及免疫试验     

邱薇  范泉水  李作生  杨美峰  郑颖  李丽红  王双印  李江  夏咸柱 《动物医学进展》2006,27(3):78-81

以犬细小病毒基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增了全长VP1基因,PCR产物经纯化和NotⅠ/BamHⅠ双酶切后与同样处理的真核表达载体pIRES进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选了真核重组表达质粒pIRESVP1,并进行了序列测定。对6只9月龄犬分别接种不同剂量的pIRESVP1或空载体质粒及生理盐水,8周接种1次,每次接种前采血,测定血清的血凝抑制抗体效价,第2次免疫后即可检测到较高的血清效价。在第3次接种4周后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7天及第14天时采血,测定血清的血凝抑制抗体效价。所有接种pIRESVP1疫苗的犬均能抵抗CPV强毒的攻击,而接种空载体质粒和生理盐水的对照犬则全部发病。证明所构建的核酸疫苗(pIRESVP1)能使犬免受犬细小病毒强毒的感染。  相似文献   

猪链球菌PCR检测技术研究进展     

张文东  张应国  宋建领  张富强 《动物医学进展》2006,27(6):10-14

猪链球菌是猪的一种重要病原菌,并且也会引起人的链球菌病。有35个荚膜血清型(1/21、~34),通常自发病或死亡猪体分离获得1,2,7,9型和14型菌株,其中2型是毒力最强的血清型。根据已知猪链球菌16 SrRNA及溶血素(sly)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps)、胞壁蛋白或溶菌酶释放相关蛋白(mrp)、胞外因子(epf)编码基因序列设计特异性引物,建立猪链球菌群和1(14),2(1/2),7型和9型特异性PCR或多重PCR,建立2型致病性菌株和1型高致病性菌株毒力鉴定PCR或多重PCR,用于检测和鉴别临床病料和细菌分离物中的猪链球菌,具有高敏感性和高特异性,与其他致病菌及其他血清的猪链球菌型无交叉反应,为疫病诊断及流行病学的研究提供了快速、简便和有用的工具。  相似文献   

猪瘟病毒E2糖蛋白A1亚区抗原性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

张富强李志华  张念祖 《中国兽医科技》2004,34(10):9-14

采用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，对猪瘟病毒A抗原区内的2744-2947nt基因片段(EC)进行了克隆、表达，并分析了表达产物的抗原性。研究发现，EC表达产物能与抗猪瘟病毒Alfort毒株E2蛋白的中和性单克隆抗体c2410、a18发生特异性结合，且用其免疫动物后能诱导机体产生中和抗体。结果表明，A1抗原亚区位于E2蛋白791～858位氨基酸区域。  相似文献   

中华鳖混养新模式及其技术探讨   总被引：1，自引：0，他引：1  

张富强  姚立军 《中国水产》2000,296(7)

鱼鳖混养能保持野生鳖的风味，符合消费者的需求，目前许多地方地增混养的售价远远高于温室养殖鳖的售价，陕西省大荔县东临黄河，南依渭水，从1993年就开始养殖中华鳖，不断改进养殖模式，经过几年的摸索，已形成了成熟的鱼鳖混养新模式，这种养殖循环模式在不影响鱼产量的情况下，产值比以前提高了120％，比没采用混养模式的池塘纯收益超出4000余元／亩，而且充份利用了池塘资源，在原有池塘基础上稍加改进即可进行生产，节省了大量的建地投资。现将混养新模式介绍如下：一、良性循环模式链一品出售卅留种J二、混养（－）池塘改造①池塘…  相似文献   

湘潭市郊菜园土及部分蔬菜重金属和氟污染状况的研究     

陈均一  胡瑞芝  张富强  岳振华  罗槐林  王翠红 《湖南农业大学学报(自然科学版)》1991,(Z1)

湘潭市菜园土全部受到Cd的污染,蔬莲65％超过食品卫生标准,所有菜园土均有Pb污染,其中轻度污染4个区,中度污染2个区,以0.3ppm为标准,则蔬菜含Pb超标率达100％,如以0.6ppm为摄入限量浓度,蔬菜68％超限、Cu,Zn在土壤中均有积累,但末达到引起蔬菜污染的程度,土壤采用湘江流域背景值加2倍标准差作为污染起始值进行评终,3类菜园士对几种重金属元素的积累总趋势为:煤灰菜园土>红菜园土>潮菜园土,污染物质对土壤重金属积累的影响是:煤灰垃圾>污水灌溉>气污,但F的污染则与上相反、白菜和包菜对Cu,Zn,Cd,Pb的蓄积能力顺序相同,均为Cd>Zn>Cu>Pb,对每种元素而言则白菜的蓄积能力均大于包菜。  相似文献   

不同秸秆还土方式对旱地土壤培肥和玉米产量的影响     

蒋平荣湘民  张富强罗建新蒋健容  仇少君 《中国土壤与肥料》2004,(3):7-10

采用田间小区试验研究了秸秆还土方式对旱地土壤培肥和玉米产量的影响。结果表明,秸秆翻压与覆盖均有明显培肥土壤,提高玉米产量的作用,但两种还土方式之间的差异不明显。  相似文献   

超细品系羊非发情季节同期发情实用技术研究--周岁母羊和成年母羊同期发情效果对比分析     

张永胜  魏荣安  王建华  王宏伟  王惠  毛路山  刘正山  何其宏  丁志坤  毕海霞  张富强  沙木好  马春萍  库木斯汗 《中国草食动物》2005,25(6):18-20

对中国美利奴羊（新疆军垦型）超细品系周岁母羊和成年母羊同期发情效果作了对比分析，证明经产母羊的效果明显好于初产母羊，但是返情经产母羊比初产母羊多。  相似文献   

鼠痘病毒的分离鉴定及检测方法的研究     

王家驹  李亚明  单于乃纯  张富强  江孝明 《中国预防兽医学报》1994,(4)

本实验采用自然感染鼠痘材料,以细胞培养、动物接种分离出一株病毒91-KMPV。通过人工发病、临床病理观察、病毒的电镜观察、多种细胞培养、细胞传代和多次复归本动物、毒力毒价、稳定性试验以及血清学和病毒理化特性试验等证明所分离病毒是痘病毒科正痘病毒属小鼠传染性脱脚病病毒。应用分离到病毒制备抗原及标准血清,建立了HA和HI等检测方法。为该病的监测净化提供一项简便准确的检测方法。  相似文献