pBI121载体酶切位点添加及拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白基因表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

张俊莲  王蒂  张金文  陈正华 《分子植物育种》2006,4(6):811-818

对pBI121载体GUS基因后的终止子序列（Sac Ⅰ-EcoR Ⅰ）通过PCR扩增法进行了酶切位点的添加，即在SacⅠ后添加了XhoⅠ、在EcoRⅠ前添加了KpnⅠ。序列分析发现，两个酶切位点的添加是成功的，但扩增的终止子序列与原序列的同源性间有差异，即有4个碱基发生了变异，特别是第17个碱基位点出现了缺失。利用绿色荧光蛋白（GFP）对添加酶切位点载体进行了终止子活性的检测，结果发现，它与携带GFP的pBI121载体一样，GFP基因能正常表达，说明pBI121载体终止子序列酶切位点的添加是成功的。利用改造后的载体（pBI121-GZ）构建了CaMV35S启动子驱动AtNHX1基因的植物表达载体。  相似文献   

Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae     

刘延琳  蒋思欣  何秀萍  李华  张博润 《勤云标准版测试》2005,(4)

苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶。笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建。利用来自重组质粒pLmleA的，mleA基因，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件。以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleA，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。SDS—PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中。获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量，采用t检验进行差异显著性分析，结果表明mleA基因进行了功能性的表达，将L-苹果酸转化成L-乳酸，L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著，L-乳酸的生成量为1002—1106mg／L。苹果酸的相对降低率为19．16—22．34％。  相似文献   

毛白杨叶绿体基因启动子和终止子的克隆及其功能鉴定     

张发云  尹维波  胡赞民 《农业生物技术学报》2007,15(3):439-445

摘 要：从毛白杨(Populus tomentosa)无性系植株组培苗中提取基因组总DNA，通过合成3对特异性引物，用PCR的方法扩增了包含psbA基因启动子、终止子和16S rRNA基因启动子的叶绿体DNA序列。用BLAST及DNAMAN对克隆序列进行了分析，并结合前人的研究工作，确定了两个启动子Prrn、PpsbA的-35区、-10区以及翻译调控序列等重要调控序列元件和终止子的“TAA”序列。并在序列分析的基础上合成新的引物，准确克隆了毛白杨的叶绿体16S rRNA基因启动子Prrn、psbA基因启动子PpsbA及其终止子TpsbA。利用叶绿体基因启动子的原核表达特性，分别用启动子Prrn（其后添加rbcL基因的RBS序列）和PpsbA及终止子TpsbA分别构建了GFP基因的原核表达载体pSGmT、pPGmT，并以T7启动子为对照构建了GFP基因的原核表达载体pETGm，进行了初步的原核表达实验，检测结果表明：克隆到的叶绿体基因启动子和终止子是有生物学功能的，在大肠杆菌BL21中呈组成型表达，同时还证明了RBS序列在基因表达中的重要性。  相似文献   

不同加工工艺对大豆转基因成分及调控元件的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

王林  韩飞  李爱科  刘建学  王瑛瑶 《大豆科学》2011,30(1):136-140

以转基因大豆为试验材料,运用定性PCR的方法研究了粉碎、湿热和膨化3种加工工艺对转基因大豆内源基因Lectin、外源基因Cp4 epsps以及启动子和终止子的影响.结果表明:大豆经过100℃湿热处理15 min后,内源基因降解到407 bp以下;经过100℃湿热处理15 min后,外源基因降解到408 bp以下;在10...  相似文献   

采用一种新型RNAi载体培育转基因高直链淀粉马铃薯     

郭志鸿  王亚军  张金文  张玉宝  王金牛  谢忠奎  陈正华 《作物学报》2009,35(5):809-815

采用PCR技术分别克隆nos终止子、烟草axi1内含子和烟草ubi.u4启动子,亚克隆部分与马铃薯Sbe1同源、部分与Sbe2同源的融合基因SIII,构建具有“ubi.u4启动子—反向SIII—反向nos终止子—axi1内含子—正向nos终止子”结构的异源3¢端UTR反向重复序列型RNAi载体pCUSNI,采用农杆菌介导法转化马铃薯品种陇薯3号、甘农薯2号和大西洋,获得了16个转基因植株,其中14个的块茎直链淀粉含量大幅度增加,表观直链淀粉含量介于53.80%~85.33%;但随着直链淀粉含量的升高,转基因马铃薯淀粉含量下降。半定量RT-PCR分析表明,在直链淀粉含量超过80%的转基因株系中检测不到Sbe1和Sbe2基因mRNA的积累。结果表明,异源3¢端UTR反向重复序列型RNAi载体pCUSNI能够高频、高效地同时抑制马铃薯Sbe1和Sbe2基因的表达,是一个优良的RNAi载体。以载体pCUSNI为基础,再以植物的其他基因为靶,只需在pCUSNI的BamH I和Sac I位点之间插入干涉片段替换SIII即可完成载体构建,而不必构建靶标基因的反向重复序列,使载体制备迅速便捷。  相似文献   

Taqman定量PCR技术检测转基因大豆中外源基因拷贝数   总被引：1，自引：0，他引：1  

仇有文  张明辉  高学军  曲波  敖金霞  袁肖寒  刘营  霍楠 《安徽农业科学》2011,39(17):10150-10152

[目的]采用Taqman定量PCR技术检测转基因杂交大豆中外源,Ⅲ终止子基因的拷贝数。[方法]以大豆凝集素基因为内参照基因,以非转基因大豆基因组DNA为内参照基因标准品,通过梯度稀释法分别求取了内参照基因和质粒DNA的cz值与拷贝数对数值的相关性标准曲线方程,并通过将得到的0值代入标准曲线方程求取了样品的拷贝数。[结果]内参照基因标准曲线方程为Y=-3．422x＋35．201,R^2=O．998;外源基因标准曲线方程为Y=-3．348x＋34．890,R^2=0．999。nos终止子基因及其下游边界序列在转基因杂交大豆中为单拷贝。[结论]为确定转基因大豆外源基因拷贝数提供了理论依据。  相似文献   

大肠埃希菌毒力因子ColBM质粒和转录反终止子研究进展     

夏梦芸  汤文  岳华 《动物医学进展》2010,31(5)

大肠埃希菌是临床上常见的人兽共患病的病原,其致病性是由多种毒力相关因子共同协调作用所决定的。ColBM质粒和转录反终止子(RfaH)是两个近年发现的大肠埃希菌毒力相关因子。论文对这两个大肠埃希菌毒力相关因子的研究进展进行了综述,分析其与宿主菌致病力之间的关系。  相似文献   

用无终止子的RFP报告基因捕获水稻终止子研究     

李军  瞿绍洪 《浙江农业学报》2012,24(5):758-763

基因捕获技术已被广泛应用于植物功能基因组学研究。文章构建了水稻PolyA捕获载体pLJ19,该载体含有用于检测转化事件的绿色荧光蛋白报告基因(GFP)及用于进行PolyA捕获的无终止子的红色荧光蛋白报告基因(RFP),在水稻转化愈伤组织阶段筛选同时含有GFP及RFP的转化愈伤组织并进行RFP插入位点T-DNA侧翼序列(FST)分析可获得水稻终止子序列。将pLJ19转化粳稻品种‘日本晴’的胚性愈伤组织,获得了17个具有PolyA捕获事件的愈伤组织。FST序列分析表明6个T-DNA插入在水稻基因组序列中,其中有5个T-DNA插入在水稻基因3’端附近。结果表明,pLJ19载体可用于水稻终止子捕获研究中,可为水稻终止子研究提供研究方法和材料。  相似文献   

植物防范转基因逃逸的分子策略     

贾婕  张金凤  王斌  张登荣 《中国农学通报》2008,24(4):390-393

转基因植物的外源基因可以通过花粉、种子、分泌物等方式释放到环境中去,会造成潜在的生态风险。因此如何防范转基因的逃逸,成为人们所关注的重点。综述了几种防范转基因逃逸的分子策略：叶绿体转化法、雄性不育法、终止子技术、染色体组特异性选择、外源基因删除法,分析了这几种方法的优势及存在的问题,并对将来如何更好地防范植物转基因逃逸提出了一些建设性的对策及建议。  相似文献   

转基因豆粕中内源基因和外源基因检测方法的建立     

于忠娜  苗向阳  单虎  李建霞  丁兆忠 《黑龙江畜牧兽医》2008,(2):50-52

抗草甘膦(Glyphosate)大豆(商品名:Roundup Ready Soybean)是在传统大豆中转入外源基因CaMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到的[1].由大豆加工而成的豆粕经过高温浸提、脱溶等过程,其中的DNA成分遭到破坏,容易发生降解等现象.因而如何从豆粕中有效提取DNA成分,并进行可靠的检测就成为检测部门的重要问题.  相似文献