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为了研究鱼类半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)的功能并探索其在水产品加工和病害防治中的应用潜力，将改造后的中华鲟(Acipenser sinensis)cystatin C cDNA亚克隆到原核表达载体pBV220，构建表达cystatinc的大肠杆菌基因工程菌。该工程菌经温度诱导、SDS—PAGE检测，在约12．4kD处有一特异蛋白带，该特异蛋白的含量约为菌体总蛋白的25％。重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂经洗涤、溶解、透析、复性后纯度为85％，实现了中华鲟cystatinC在大肠杆菌中的高效表达。木瓜蛋白酶活性抑制实验结果表明该重组cystatinc具有明显的酶活抑制作用。 相似文献
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茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA克隆与序列分析 总被引：11，自引：2，他引：9
对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出一204bp的cDNA特异片段,然后通过3’/5’RACE的方法,分别扩增出3’端和5’端的序列,从而获得茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA全长序列,所得序列全长627bp,编码101个氨基酸,分子量约11.062KDa。该基因在推测的氨基酸序列中含有巯基蛋白酶抑制剂家族中高度保守的、与其活性有关的QXVXG结构,且经Blast分析表明,该基因序列与其他植物巯基蛋白酶抑制剂基因的氨基酸序列同源性为54%~77%。 相似文献
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Corrin J. Boyd Melissa A. Claus Anthea L. Raisis Rachel Cianciolo Erika Bosio Giselle Hosgood Mary Nabity Trevor Mori Anne Barden Claire R. Sharp Lisa Smart 《Journal of Veterinary Emergency and Critical Care》2019,29(2):132-142
Objective : To investigate the association between synthetic colloids and biomarkers of acute kidney injury (AKI) in dogs with hemorrhagic shock. Design : Experimental interventional study. Setting : University. Animals : Twenty‐four healthy ex‐racing Greyhounds. Interventions : Anesthetized Greyhounds subjected to hemorrhage for 60 min were resuscitated with 20 mL/kg of fresh whole blood (FWB), 6% hydroxyethyl starch (HES) 130/0.4, 4% succinylated gelatin (GELO), or 80 mL/kg of isotonic crystalloid (CRYST) over 20 min (n = 6 per treatment). Concentrations of biomarkers of AKI were measured at baseline, end of hemorrhage, and at 40 (T60), 100 (T120), and 160 (T180) min after fluid bolus. Biomarkers included neutrophil gelatinase‐associated lipocalin in urine and serum (uNGAL; sNGAL), and urine cystatin C (uCYSC), kidney injury molecule‐1 (uKIM), clusterin (uCLUST), osteopontin, gamma‐glutamyl transferase, monocyte chemoattractant protein‐1 (uMCP), interleukin‐6, interleukin‐8, protein (uPROT), hyaluronan, and F2‐isoprostanes. Renal histology was scored for tubular injury and microvesiculation. Biomarker fold‐change from baseline was compared between groups using mixed effects models (Bonferroni–Holm corrected P<0.05). Frequencies of histology scores were compared by Fisher's exact test. Measurements and main results : In dogs treated with GELO, uNGAL fold‐change was markedly greater compared with all other groups at T60, T120, and T180 (all P<0.001), and uCYSC was greater at T60 compared with CRYST (P<0.001), and at T120 and T180 compared with all other groups (all P<0.001). Smaller, albeit significant, between‐group differences in uKIM, uCLUST, uMCP, and urine protein concentration were observed across the FWB, GELO, and HES groups, compared with CRYST. The GELO group more frequently had marked tubular microvesiculation than the other groups (P = 0.015) although tubular injury scores were comparable. Conclusion : In dogs with hemorrhagic shock, GELO was associated with greater magnitude increases in urine biomarkers of AKI and more frequent marked tubular microvesiculation, compared with FWB, CRYST, and HES. 相似文献
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抗性验证试验表明籼稻大白谷抗水稻干尖线虫侵染。为进一步探究此抗性与病程相关蛋白——半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)的相关性,基于水稻基因组数据克隆籼稻大白谷Cystatin家族的OC-XII基因,分别进行OC-XII、Japonica-OC-XII和Indica-OC-XII蛋白质三维结构构建,并与水稻干尖线虫组织蛋白酶B(Cathepsin B)进行分子对接以验证OC-XII基因编码蛋白对Cathepsin B的抑制功能。通过荧光定量qPCR验证OC-XII基因在线虫侵染前后的表达特性,OC-XII蛋白可以与水稻干尖线虫Cathepsin B蛋白质特异结合,线虫侵染后OC-XII基因在浸染12h~2d期间表达量持续上调,侵染3d后下调。表明OC-XII基因在大白谷抗水稻干尖线虫侵染过程中发挥功能,具有对植物寄生线虫进行生物防治的潜力,有必要对其进行深入研究。 相似文献
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半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)参与豆科植物与根瘤菌共生结瘤过程。克隆了大豆的1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因GmCYS20,基因编码区全长为291 bp。氨基酸多序列比对分析发现,大豆GmCYS20蛋白与野生大豆cystatin蛋白相似性高达99%。构建GmCYS20基因的植物表达载体,通过发根农杆菌介导的百脉根发状根转化法获得转GmCYS20基因复合体植株,利用GUS染色和RT-PCR方法鉴定阳性发状根。复合体植株接种根瘤菌4周后,转GmCYS20基因植株结瘤数目明显高于空载体对照,结瘤指示基因的转录水平也呈上升趋势。进一步对接种10 d复合体植株中根瘤菌的侵染表型进行统计发现,过量表达GmCYS20基因并不影响根瘤菌的侵染过程,而是在根瘤起始与发育阶段发挥正调控作用。结果表明:GmCYS20基因通过促进根瘤的起始与发育,从而参与调控共生结瘤过程。研究结果可为揭示豆科植物与根瘤菌的共生互作机制提供新的分子生物学证据。 相似文献
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Overexpression of StCYS1 gene enhances tolerance to salt stress in the transgenic potato(Solanum tuberosum L.) plant 
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下载免费PDF全文 LIU Min-min LI Ya-lun LI Guang-cun DONG Tian-tian LIU Shi-yang LIU Pei WANG Qing-guo 《农业科学学报》2020,19(9):2239-2246
Salt stress seriously restricts the growth and yield of potatoes. Plant cystatins are vital players in biotic stress and development, however, their roles in salt stress resistance remain elusive. Here, we report that StCYS1 positively regulates salt tolerance in potato plants. An in vitro biochemical test demonstrated that StCYS1 is a bona fide cystatin. Overexpression of StCYS1 in both Escherichia coli and potato plants significantly increased their resistance to high salinity. Further analysis revealed that the transgenic plants accumulated more proline and chlorophyll under salt stress conditions. Moreover, the transgenic plants displayed higher H2 O2 scavenging capability and cell membrane integrity compared with wild-type potato. These results demonstrate that StCYS1 is closely correlated with salt stress and its overaccumulation can substantially enhance salt stress resistance. 相似文献
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石万元;杨帅;李芙琴 《张家口农专学报》2013,(3):104-106
目的探讨糖化血红蛋白(HbA1c)、血清胱抑素C(Cys C)和尿微量白蛋白排泄率(UAER)联合检测对糖尿病早期肾脏损伤诊断的价值。方法选择2型单纯糖尿病(DM)患者40例、2型糖尿病肾病(DN)患者35例及40例健康体检者,分别检测其糖化血红蛋白、血清胱抑素C和尿微量白蛋白排泄率,评价各项测定结果的关系。结果 DN组的Cys C、UAER检测结果显著高于另两组,差异均有统计学意义(P<0.01),DN组的HbAlc检测结果也比另两组高,差异有统计学意义(P<0.05);DM组HbA1c、Cys C和UAER均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);HbAlc与Cys C、UAER分别进行直线相关回归,均呈正相关(P<0.05)。结论 HbA1c、Cys C和UAER与2型糖尿病患者的早期肾损伤程度密切相关,联合检测此3项指标对于糖尿病肾损伤的早期诊断、治疗和监测意义重大。 相似文献
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猪Cystatin B基因cDNA克隆及遗传多态性分析 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因－半胱氨酸蛋白酶抑制素B（Cystatin B,CSTB）基因对肌肉宰后嫩化的作用,为研究嫩度性状的遗传机理提供理论基础。【方法】采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆到猪CSTB基因cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。采用PCR-RFLP方法,分析了84头猪CSTB基因多态性及其与嫩度性状的关联性。【结果】CSTB基因开放阅读框全长294 bp,编码98个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛的CSTB基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为81%、85%和89%,推测氨基酸序列同源性为83%、76%和85%。蛋白质结构同源建模分析表明,该蛋白与人、鼠Cystatin B类似,具有stefin类蛋白酶抑制剂的典型空间结构,包括5条平行的β-sheet和负责与被抑制酶结合的楔形边缘。在CSTB基因第二内含子内PvuⅡ酶切位点检测到了AA、AB和BB这3种基因型,关联性分析表明AA基因型个体的各项嫩度指标均极显著低于另2种基因型的个体（P＜0.01）,最大剪切力为5.11 kg,硬度值为19.31 kg•s、平均剪切力为3.26 kg。【结论】CSTB基因在不同物种间具有较高同源性,猪CSTB基因多态性与猪肉嫩度性状显著相关。 相似文献
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玉米自交系B73全基因组cystatin抗虫基因家族分析 总被引：1，自引：0，他引：1
半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因具有cystatin结构特征的蛋白结构域,广泛存在于植物或动物体内。此类基因在植物或动物蛋白质组中具有多个功能各异的家族成员,并在抗虫中扮演重要角色。通过利用玉米B73全基因组的基因表达序列数据,对12个cystatin基因的结构组成、染色体分布、系统进化等进行了分析。鉴定了该基因家族在蛋白序列间3个高度保守基序,构建了基因家族系统进化树,为该重要基因家族的进化提供了依据的同时也为克隆和分离该类抗虫基因提供参考。 相似文献
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基因重组cystatin对鲢鱼糜肌球蛋白的保护作用初探 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了基因重组中华鲟半胱氨酸蛋白酶抑制剂(recombinantChinesesturgeoncystatin)基因在毕赤酵母中的表达和以鲢为原料制作鱼糜过程中添加与未添加recombinantcystatin情况下肌球蛋白的含量变化趋势。结果表明重组cystatin对木瓜蛋白酶具有较强的抑制活性,曲线方程为y=0.0234x 0.0059。SDS PAGE电泳和分析结果表明添加重组cystatin可使鱼糜肌球蛋白具缓和内源性蛋白酶降解作用,具有明显的保护作用。 相似文献