原生原体融合构建高效降解工程菌的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

《中南林学院学报》2001,21(2):42-46

  相似文献   

ST融合蛋白的酵母表面展示及其对大鼠小肠黏膜结构的影响     

沙洲  李诗语  卢晓冉  王莉  卜昭阳  王兴龙 《中国兽医学报》2018,(2):316-325

本试验旨在获得能够将大肠杆菌ST融合蛋白展示在酿酒酵母表面的重组酿酒酵母基因工程菌并探究其对大鼠小肠黏膜结构的影响。将estA和estB基因克隆至pYD1质粒中,构建重组质粒pYD1-estA-estB,应用酵母表面展示技术获得EBY-100/pYD1-estA-estB重组酵母基因工程菌。选取36只SPF级SD大鼠,随机分为空白对照组、工程菌组、酵母菌组,分别灌胃生理盐水、工程菌菌液、酿酒酵母菌菌液,持续灌胃21d后连续3d灌胃大肠杆菌H10407菌液,取各组大鼠的十二指肠、空肠、回肠制作切片,观察各段小肠绒毛的长度、宽度、隐窝深度及绒毛长度/隐窝深度(V/C)进行统计分析。利用ELISA、real-time PCR技术观察肠道黏膜中的SIgA、IL-2、IL-4和IFN-γ含量变化。结果显示,通过免疫荧光试验证明大肠杆菌ST融合蛋白成功在酿酒酵母表面展示;灌胃21d时,与空白对照组相比,工程菌组及酵母菌组的十二指肠绒毛长度、V/C值显著升高(P0.01),工程菌组绒毛宽度显著升高(P0.05);空肠绒毛长度、V/C值显著升高(P0.01),隐窝深度显著下降(P0.05);工程菌组和酵母菌组的回肠绒毛长度及V/C值显著升高(P0.01)。灌胃大肠杆菌后,各组与灌胃前相比,空白对照组及酵母菌组的十二指肠与空肠绒毛长度、V/C值显著下降(P0.01),空肠隐窝深度显著升高(P0.01),回肠V/C值显著下降(P0.01);工程菌组无明显变化。灌胃21d,工程菌组与酵母菌组的SIgA、IL-2、IL-4和IFN-γ含量均显著高于空白对照组(P0.01);攻毒大肠杆菌后,空白对照组及酵母菌组的SIgA、IL-2和IL-4含量均显著下降(P0.01),各组的IFN-γ含量显著升高(P0.01)。结果表明,EBY-100/pYD1-estA-estB重组酵母基因工程菌不仅具有酵母菌的益生作用,能促进小肠黏膜发育,而且对产肠毒素大肠杆菌引起的肠道黏膜损伤有一定的保护作用。本试验为新型微生态制剂的研发提供依据。  相似文献   

表达鸡α干扰素重组酿酒酵母菌的构建与鉴定     

杜伟立  尹美辰  杨理凯  张涛  王令  路宏朝 《动物医学进展》2017,38(9)

通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基因插入真核表达载体,通过菌落PCR和DNA测序确定目标载体,构建成功后转化至酿酒酵母AH109,再通过营养缺陷培养、质粒提取和PCR鉴定带JMB440-ChIFN-α载体的重组酵母菌株。最终通过酵母培养、总蛋白收集、SDS-PAGE电泳和Western blot等,确定鸡α干扰素基因能够与酵母菌株重组,并表达α干扰素,蛋白条带大小约为23ku,与预期结果一致,表明成功构建了表达鸡干扰素基因的工程酵母菌株。  相似文献   

酿酒酵母细胞壁和细胞膜应对高渗胁迫机制研究     

郭红  邱月  魏建平  张宇翔  袁亚宏  岳田利 《农业机械学报》2020,51(6):346-352

酿酒酵母是食品发酵最常用的菌种之一,酵母应对高渗胁迫的能力决定食品发酵的成功与否以及食品腐败的危害程度。为研究高糖压力对酿酒酵母的影响,测定了酿酒酵母在应对极端高糖压力(0. 6 g/m L)时细胞壁几丁质和葡聚糖含量的变化,采用CFW染料和葡聚糖特异性降解酶对细胞壁的敏感性进行分析,并进一步通过双染料(PI和Hoechst 33342)染色对酿酒酵母细胞膜完整性进行分析,最后通过RNA测序研究了酿酒酵母在极端高糖压力下表达的全局差异基因。结果表明:高糖压力改变了酿酒酵母细胞壁和细胞膜的特性。全局转录测试结果显示,高糖压力通过下调酿酒酵母与细胞壁完整性(CWI)信号传导途径相关的基因ROM1、RLM1、PIR3、YGP1、CWP1等,进行细胞壁损伤的应激反应,高糖压力还通过下调酿酒酵母与细胞膜成分相关的基因(如PDR15和YOR1)造成了细胞膜损伤。最后,比较了酿酒酵母在不同压力因子(0. 2 g/m L糖、0. 4 g/m L糖、0. 6 g/m L糖和柠檬醛压力)下细胞依赖RLM1调控的CWI信号传导途径的差异调节,结果发现,在CWI中起关键作用的RLM1仅在0. 6 g/m L糖的极端压力下被下调。  相似文献   

酿酒酵母菌胞内海藻糖提取工艺参数的优化     

岳田利  赵志华  王燕妮  袁亚宏  彭帮柱  高振鹏 《农业机械学报》2007,38(4):93-97

建立了超声破碎酿酒酵母细胞和冷三氯乙酸化学浸提海藻糖的工艺，探索了离子色谱分析技术条件，采用响应曲面法（RSM），研究了液料比R、超声功率W、工作时间T1、超声总时间T2和浸提时间T3等5个试验关键因子对海藻糖提取的影响规律，并构建了动态控制的数学模型，得到了海藻糖提取最优工艺参数依次为：尺为7、W为698W、T1为4．9s、T2为7．3min、T3为9min。结果表明：模型极显著，具有可行性和有效性，超声功率、工作时间和超声总时间对海藻糖提取量的影响最大，为生产中的应用提供了科学依据。  相似文献   

不同酿酒酵母细胞壁对断奶仔猪早期生长性能及免疫的影响     

谢智文  董毅  徐杰  黄鑫  廖灿青  胡骏鹏 《中国饲料》2022,1(17):147-150

为探究不同酿酒酵母细胞壁对断奶仔猪早期生长性能及免疫性能的影响,试验选取28日龄的杜×长×大三元杂交断奶仔猪72头,按平均体重相近似、公母各半的原则分为3个处理组,每组4个重复,每个重复1栏猪,每栏公母各3头猪。对照组饲喂基础日粮,试验组1饲喂基础日粮+2 kg/t酿酒酵母细胞壁A,试验组2饲喂基础日粮+2 kg/t酿酒酵母细胞壁B,试验期为14 d。结果显示：各试验组的断奶仔猪平均日增重（ADG）较对照组略高,料重比（F/G）较对照组略低,差异不显著（P ＞ 0.05）|试验组1的仔猪腹泻率较对照组下降69.83%,差异显著（P ＜ 0.05%）,试验组2的仔猪腹泻率较对照组下降25.14%,差异不显著（P ＞ 0.05）|试验组2的猪血清中球蛋白含量较对照组高36.9%,差异显著（P ＜ 0.05）,试验组1的猪血清中球蛋白较对照组高19.48%,差异不显著（P ＞ 0.05）。综上,在本试验条件下,添加2 kg/t酿酒酵母细胞壁A对缓解断奶仔猪早期腹泻效果最佳,添加2 kg/t酿酒酵母细胞壁B,提升断奶仔猪早期免疫性能效果最佳。 [关键词] 酿酒酵母细胞壁|断奶仔猪|生长性能|免疫性能|腹泻率  相似文献   

花生非淀粉多糖和抗氧化肽同步提取技术研究     

于丽娜  ;王玮  ;孙杰  ;毕洁  ;张初署  ;杨庆利 《花生学报》2014,(1):7-15

研究米曲霉和酿酒酵母混合固态发酵热榨花生粕同步提取花生非淀粉多糖和抗氧化肽,为花生粕的高值化利用提供理论基础。以发酵产物的可溶性氮浓度、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟自由基清除率和非淀粉多糖得率为考察指标,研究了菌种比例、接种量、营养盐溶液量、发酵温度、发酵时间、水浴温度和水浴时间对发酵效果的影响,确定最佳工艺条件为:菌种比例1∶2,接种量3mL,营养盐溶液添加量30mL,发酵温度33℃,发酵时间42h,水浴温度40℃,水浴时间6h。此工艺下发酵产物的可溶性氮浓度为46.32mg/mL、DPPH自由基清除率为71.90%、羟自由基清除率为96.96%、非淀粉多糖得率为4.36%。发酵产物经乙醇沉淀和超滤分离得到的花生非淀粉多糖和抗氧化肽产品具有清除自由基、抑制脂质过氧化、金属离子螯合力和还原力等4大类抗氧化活性。  相似文献   

酿酒酵母ptc1缺失株在含盐培养基中的表型试验     

李微微 《山东畜牧兽医》2013,(11):17-18

为证明酿酒酵母的PTC1基因与其耐盐性的关系，将酿酒酵母野生型菌株BY4741和ptc1△缺失株涂布于5种培养基中（YPD＋0．1MLiCl，YPD＋0．2MLiCl，YPD＋0．3MLiCl，YPD＋0．4MLiCl和YPD），在30℃条件下培养，观察酿酒酵母野生型和PTCl缺失型在培养基中的表型。结果表明，PTCl基因通过调控HOGMAPK途径从而影响酿酒酵母的耐盐性。  相似文献   

棉粕源生物蛋白饲科料发酵工艺参数的优化     

于磊  冯莉  张文举  石国庆 《黑龙江畜牧兽医》2011,(4):86-88

为了优化棉粕源生物蛋白饲料二元复合发酵工艺参数,试验采用二因子重复设计方法,测定发酵产物中游离棉酚(free gossypol,FG)含量,确定优化热带假丝酵母(Candida tropicalis ZD-3)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ZD-5)对棉粕源基础底物复合发酵的接种量和接种...  相似文献   

Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae     

刘延琳  蒋思欣  何秀萍  李华  张博润 《勤云标准版测试》2005,(4)

苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶。笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建。利用来自重组质粒pLmleA的，mleA基因，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件。以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleA，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。SDS—PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中。获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量，采用t检验进行差异显著性分析，结果表明mleA基因进行了功能性的表达，将L-苹果酸转化成L-乳酸，L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著，L-乳酸的生成量为1002—1106mg／L。苹果酸的相对降低率为19．16—22．34％。  相似文献