胸腺肽αl原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达     

崔雪志  马凤龙  乔彦良  刘焕奇  任庆娜  刘焕珍 《中国农学通报》2008,24(7):22-25

构建胸腺肽αl（Thymosin αl,Tαl）基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,为大量获得胸腺肽αl打下基础。将人工合成的Tαl三串体基因插入到表达载体pET32a后,CaC12法转化大肠杆菌BL21,经氨苄青霉素筛选后用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测BL21中胸腺肽αl的表达。大肠杆菌中检测到与目的蛋白相对分子量(31kD)相符的条带。成功构建了Tαl原核表达载体,该蛋白能在大肠杆菌中表达。  相似文献   

结核分枝杆菌酯酶Rv1400c原核表达及表达产物的酶活性分析     

陶荣珊  李金伟  刘思国  王全凯 《吉林农业大学学报》2014,(6)

为探究结核分枝杆菌酯酶Rv1400c活性,以进一步研究Rv1400c的结构和功能。以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,对Rv1400c基因进行扩增,并将其克隆到p ET28b(+)原核表达载体上,构建p ET28b-Rv1400c重组质粒,然后将构建的重组质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,增菌后用IPTG进行诱导表达再用亲和层吸树脂法进行纯化,利用不同底物、不同p H、不同温度对纯化后的Rv1400c酯酶进行活性分析。结果表明:成功构建出p ET28b-Rv1400c重组质粒;SDS-PAGE和Western blot显示,Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;在对8种底物的筛选中发现Rv1400c在C2~C14中具有活性,其中以在C2中活性最好;在以C12为底物、p H 8.0、37℃条件下酯酶活性最高。  相似文献   

金丝桃素合成酶基因的克隆及其表达     

王力  张娜  张秀清  孙君社 《华北农学报》2005,20(4):1-3

自然条件下金丝桃素在植物中的含量较低且不稳定，提取工艺受其他物质的影响较大，在一定程度上限制了金丝桃紊在医药、食品等领域的应用。为了研究金丝桃紊合成途径并实现其体外转化，以贯叶连翘愈伤组织总RNA为模板，经RT-PCR扩增得到了编码金丝桃素合成酶的全长eDNA，即Hyp基因。将该基因克隆到原核表达载体pET30a中，成功构建金丝桃索合成酶表达载体pET30a-Hyp，并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中。含有重组质粒的克隆在IPTG诱导下，表达出金丝桃素合成酶融合蛋白，利用Ni柱纯化菌体裂解上清中表达的融合蛋白，对纯化产物进行SDS-PAGE分析，结果Hyp基因得到了高效表达，大小约为20kD。  相似文献   

基因工程菌发酵秸秆水解液产生物柴油     

王兵  竺利红  赵宇华  王欣  孙东昌 《浙江农业学报》2014,26(2):0

目前生物柴油的价格是石化柴油的15倍,寻求新的廉价易得的原料降低生物柴油的成本是必然趋势。作物秸秆是一种低廉普遍的废弃物,秸秆中含有纤维素,半纤维素等成分,水解成单糖后可以作为合成生物柴油所需的糖类来源。利用前期研究构建的基因工程菌Escherichia coli pET28a(+) PAW发酵秸秆(玉米秸秆和小麦秸秆)水解液得到乙醇,并在胞内将乙醇与外源添加的脂肪酸进行同步转化合成生物柴油的主要成分脂肪酸乙酯。HPLC分析表明玉米水解液中葡萄糖含量(1040 g·L-1)较高,小麦水解液中木糖含量(4056 g·L-1)较高。E. coli pET28a(+) PAW能够有效地以小麦和玉米两种秸秆水解液作为糖类替代物发酵生产生物柴油,小麦水解液培养基中的生物柴油含量(030 g·L-1)高于玉米水解液培养基中的含量(025 g·L-1),同时也高于现有报道。结果表明,以秸秆水解液作为原料,利用基因工程菌合成生物柴油是可行的,有助于降低生物柴油的原料成本。  相似文献   

丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建     

张婷婷  王春丽  韩蕊莲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2011,39(8):158-162

【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因（SmC4H）的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。  相似文献   

丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建          下载免费PDF全文

张婷婷  王春丽  韩蕊莲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2011,39(7):158-162

【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。  相似文献   

截短NDV F蛋白的原核表达     

王杰  王宇鹏  刘振格  杨鸣发  林红丽  田斌  侯喜林 《黑龙江八一农垦大学学报》2013,(6):39-42

根据NDVLaSota株F基因已知的抗原表位,对F蛋白进行分段表达。应用RT—PCR方法分段扩增F基因,并将其克隆到pET30a（＋））原核表达载体上,得到重组质粒pET30-F780和pET30-F760,将质粒导人BL21（ED3）感受态中,经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白通过SDS—PAGE和Westem—blotting方法进行鉴定。表达的两段蛋白大小约为31．1kDa和27．9kDa,与预期的蛋白分子量大小相符。Westernblot分析表明重组蛋白可以和NDV抗体发生特异性反应。成功构建了原核表达质粒pET -F780和pET—F760并获得了高效表达,通过Westernblot分析表明重组蛋白具有良好的免疫反应性。  相似文献   

苹果属小金海棠转录因子MxMYB1基因的克隆及其原核表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

曹冬梅  许雪峰  韩振海 《园艺学报》2006,33(4):833-835

 MxMYB1是苹果属小金海棠MYB类转录因子。MxMYB1含1个重复序列及MYB蛋白特有的氨基酸组成。酶切、PCR扩增及测序分析表明构建的原核表达载体结构正确, 未出现碱基突变及移码现象。1 mmol/L IPTG诱导2 h后, 在预期的蛋白分子量38 kD处出现1条表达加强的蛋白条带, 而未经诱导的转化子没有此蛋白条带。为进一步目的蛋白的纯化和鉴定提供试验基础。  相似文献   

胸腺肽αl原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达     

崔雪志  马凤龙  乔彦良  刘焕奇  任庆娜  刘焕珍 《勤云标准版测试》2008,(7)

 构建胸腺肽αl（Thymosin αl,Tαl）基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,为大量获得胸腺肽αl打下基础。将人工合成的Tαl三串体基因插入到表达载体pET32a后,CaC12法转化大肠杆菌BL21,经氨苄青霉素筛选后用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测BL21中胸腺肽αl的表达。大肠杆菌中检测到与目的蛋白相对分子量(31kD)相符的条带。成功构建了Tαl原核表达载体,该蛋白能在大肠杆菌中表达。  相似文献   

臭鼻杆菌腈水解酶基因(bxn)的克隆及其在原核生物中的表达   总被引：7，自引：1，他引：6  

张金文  熊春蓉  李静雯  王旺田  孟亚雄  陈正华 《草业学报》2006,15(6):87-92

通过PCR技术从克雷伯氏臭鼻杆菌基因组DNA中克隆到编码腈水解酶的基因(bxn),插入pET28a( )载体的NcoI和SacI之间,构建了bxn基因的原核生物表达载体pET-BX。通过SDS-PAGE鉴定出重组克隆,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出了一种37.7 kD的特异蛋白,其表达量占宿主菌总蛋白的18.2%。在添加终浓度为4mmol/L的乳糖和28℃培养条件下,重组克隆菌可表达较高产量的特异酶蛋白,可将溴苯腈降解为无毒物质,并具有较高活性。  相似文献