犏牛和牦牛ESCO2基因的序列特征及其在睾丸中的表达对比分析     

闵星宇  杨丽雪  杨满珍  胡宇磊  于海玲  杨璐瑜  李键  熊显荣 《畜牧兽医学报》2021,52(11):3126-3136

旨在克隆犏牛和牦牛姐妹染色单体内聚建立蛋白2（establishment of sister chromatid cohesion N-acetyltransferase 2,ESCO2）基因,并分析其在不同发育阶段睾丸中的表达与定位,为进一步解析ESCO2在减数分裂过程中的作用机制提供理论依据。本研究以健康雄性犏牛及牦牛为试验动物,根据年龄分为胎牛组（5~6月龄）、幼年组（1~2岁）和成年组（3~4岁）,每组各3头。通过RT-PCR技术克隆犏牛和牦牛ESCO2基因并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR （quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测ESCO2基因在犏牛不同组织中的表达谱,比较分析ESCO2在犏牛和牦牛不同时期睾丸中的表达规律,利用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）技术检测ESCO2蛋白的细胞定位和表达差异。结果显示,犏牛ESCO2基因（GenBank登录号：MW198470） CDS区为1 833 bp,编码610个氨基酸,与牦牛相比,犏牛ESCO2序列第301~319位多19个氨基酸,另有3个氨基酸突变;犏牛ESCO2蛋白序列与黄牛的同源性高于其他哺乳动物;ESCO2可能与SMC3、SMC1A、PDS5A、PDS5B、STAG2等蛋白相互作用,互作蛋白功能与姐妹染色单体凝聚、减数分裂细胞周期、DNA修复、细胞分裂和染色体重构等生物学过程相关。ESCO2在犏牛各组织中均有表达,但在睾丸中的相对表达水平显著高于其它组织（P<0.05）;在犏牛睾丸中的表达随年龄增长呈上升趋势,幼年和成年时期犏牛睾丸中ESCO2的表达显著低于同时期牦牛（P<0.05）;IHC染色结果发现,雄性犏牛减数分裂阻滞于初级精母细胞,ESCO2蛋白在犏牛初级精母细胞中无表达并与牦牛存在差异。本研究结果表明,犏牛与牦牛的ESCO2基因、蛋白序列差异较大,且在睾丸发育过程中的表达模式差异显著,这可能是引起雄性犏牛减数分裂阻滞及不育的原因之一,其具体作用机制有待进一步研究。  相似文献   

草地贪夜蛾种群性诱测报方法研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

和伟  赵胜园  葛世帅  姜玉英  赵新成  吴孔明 《植物保护》2019,45(4):48-53

草地贪夜蛾已经成为中国农业生产的重大害虫,准确地预测预报是指导防治的基础。本研究采用国产草地贪夜蛾性诱剂诱陷多测试了3种不同类型诱捕器对草地贪夜蛾的田间诱捕效果。结果表明,诱陷多有效期可达60 d以上,3种诱捕器中以桶型诱捕器诱捕量最高。实验室研究显示,不同日龄草地贪夜蛾雄虫精巢长轴长度有显著性差异,精巢长轴长度随日龄增加不断减小。据此规律,制定了按照精巢长轴大小判断雄蛾日龄的指标,并反演重构了田间雌、雄虫种群羽化的动态曲线。本研究表明,可以利用性诱到的雄虫的精巢发育状况推算田间种群的年龄结构,进而达到通过预测雌虫产卵与幼虫孵化动态指导防治的目的。  相似文献   

水貂取皮期与配种期睾丸形态参数测定及组织学观察     

宋兴超 《特产研究》2014,(1):5-9

为探明水貂睾丸的季节性变化规律,试验测定了取皮期和配种期雄性水貂睾丸的基础形态参数,通过石蜡切片、苏木精-伊红染色方法对取皮期和配种期水貂的睾丸及附睾进行了组织学结构特征比较。结果表明,水貂取皮期睾丸呈长卵圆形,平均长径、短径和厚径分别为16.88mm±1.52mm、10.90mm±0.85mm和10.28mm±1.03mm,体积为1.05cm3±0.23cm3,平均重量达到1.032 3g±0.263 3g;水貂配种期睾丸呈短卵圆形,各项形态生理参数、体积及重量极显著高于取皮期(P0.01)。在光镜下,与取皮期相比,配种期水貂睾丸生精小管内细胞层数和种类较多,包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞,生精小管与附睾管管腔中存在大量精子。而取皮期生精小管内细胞疏松,仅见少量精原细胞,并且配种期生精小管直径极显著高于取皮期(P0.01)。  相似文献   

猪睾丸组织定量PCR分析中内参基因的选择   总被引：2，自引：0，他引：2  

彭馥芝  冉茂良  翁波  李智  董莲花  陈斌 《中国农业科学》2017,50(15):3033-3041

【目的】采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)对基因表达进行分析时,选择适当的内参基因是获得准确分析结果的关键。在猪睾丸分子生物学研究中,表达稳定的蛋白编码内参基因和micro RNA(miRNA)内参基因均有哪些目前尚不清楚。本研究旨在筛选出合适的内参基因,为准确定量不同时期猪睾丸组织中目的基因的表达提供可靠依据。【方法】选用8个不同发育时期(E 90、D 1、D 30、D 60、D 90、D 120、D 150、DM)的猪睾丸组织为材料,采用Trizol裂解法提取各样品的总RNA,利用Nan Drop ND-2000分光光度计检测总RNA的浓度和纯度。设计并合成已报道的猪其他组织中表达相对稳定的5个编码内参基因(GAPDH、TBP、β-actin、SDHA和B2M)以及5个miRNA内参基因(U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103)的特异性引物序列,逆转录得到cDNA模板后,按1:10梯度稀释为7个浓度梯度进行qRT-PCR反应以构建标准曲线。并对10个候选内参基因在各时期睾丸组织中的表达情况进行实时荧光定量全面检测,采用Ge Norm法对定量结果进行综合分析,最后根据内参基因稳定性值(M值)的大小筛选出最稳定的参考基因;M值越小,表明内参基因的稳定性越好,反之则越差。【结果】对GAPDH、TBP、β-actin、SDHA、B2M、U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103 10个候选内参基因的熔解曲线进行分析发现,均无非特异扩增及引物二聚体,说明各内参基因特异性良好,qRT-PCR反应的专一性高;以Ct值为纵坐标,相对拷贝数的对数为横坐标进行标准曲线分析可知,各内参基因在系列稀释的浓度梯度内具有良好的线性关系;通过对10个候选内参基因在不同时期猪睾丸组织中的表达稳定性分析发现,蛋白编码基因中,最稳定的为TBP,最不稳定的是GAPDH;miRNA候选内参中,最稳定的为U6,最不稳定的是ssc-miR-26a。【结论】成功筛选出猪睾丸组织基因表达分析中稳定表达的内参基因TBP和U6,可作为猪睾丸组织基因表达研究中最佳内参基因候选者。  相似文献   

单环刺螠精巢年周期发育及精子发生   总被引：1，自引：0，他引：1  

王航宁  邵明瑜  张志峰 《中国水产科学》2011,18(5):1189-1195

采用组织学方法观察了单环刺螠(Urechis unicinctus)精巢的形态结构及其年周期发育,并利用超微技术观察了精子的发生过程。结果表明,单环刺螠的精巢呈条带状,位于虫体尾部,两端通过肌束分别与呼吸肠管壁外侧和体壁内侧相连。精巢由生精细胞团与结缔组织组成,结缔组织位于精巢中央,精原细胞团分布于结缔组织外周,精母细胞团散布于结缔组织内,各级精母细胞脱离精巢落入体腔液中,历经精母细胞、精细胞,最后形成精子脱离细胞团进入肾管。根据精巢的组织学特征,将单环刺螠的精巢年周期发育划分为增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期5个时期。光镜和电镜下观察了精巢和体腔液中精子发生各时期的结构变化,包括细胞核形态的变化、顶体发生以及尾部的形成。本研究揭示了单环刺螠的精巢发育特点、精子发生历经的场所和分化特征。  相似文献   

人工诱导花鳗鲡的精巢发育成熟及其精子的生物学特性   总被引：1，自引：1，他引：1  

周雯伊  黄海  尹绍武  齐鑫  张勇  刘晓春  陈国华  林浩然 《水产学报》2009,33(1):53-59

用肌肉注射HCG的处理方式（剂量为500U/㎏•体重,每周注射1次,注射时间为6周）诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,成熟率达80.0%。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明：花鳗鲡精子头部长径为3.81±0.69µm,短径为1.24±0.15µm;尾部长度为24.83±3.05µm;精液pH为7.3~7.5,精子密度为1.02×1010尾/ mL。精子的适宜盐度为15~20,其中盐度为15时,精子激活比率最高,快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6.0~8.0,pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外,4 种金属离子(Mg2+、Ca2+、Na+和K+)对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致,金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0.4~0.6g/mL时,精子活力最好,最高激活比率为3级（41.0%~60.0%）。  相似文献   

Retracted: Study of testis histology and sperm morphology in the Bunnei,Barbus sharpeyi (Gunther, 1874) induced by luteinizing hormone‐releasing hormone analogue and carp pituitary extract          下载免费PDF全文

Mohammad R Kalbassi  Reza Lorestani  Mohammad S Aramli 《Aquaculture Research》2017,48(2):473-480

This study was conducted to determine the effects of hormone treatment on testis structure in Barbus sharpeyi, as well as the morphology of sperm examined by scanning electronic microscopy (SEM). Male B. sharpeyi were divided into three groups (three fish per group) and injected with luteinizing hormone – releasing hormone analogue (LHRH–A₂) or carp pituitary extract (CPE). The first and second groups were treated with 10 μg kg^?1 LHRH–A₂ and metoclopramide (MET), and their testis were sampled pre‐ and Poststripping respectively. The third group received 2 mg kg^?1 CPE and were killed pre‐stripping. Based on the histological results obtained, the testicular connective tissue of the lumen was thicker, and seminal vesicles were of a lower volume, in fish injected with CPE in comparison to the other groups. After treatment with LHRH–A₂ and MET, not all spermatozoa within the testis were ejaculated, and only a small amount of sperm was obtained by abdominal stripping. The highest and lowest diameters of connective tissue within lobules were observed in fish receiving CPE and LHRH–A₂ treatments respectively. There was a significant difference (P < 0.05) in lobule space between the fish injected with the CPE and the fish injected with the LHRH–A₂ and MET. The SEM results revealed that the spermatozoa of B. sharpeyi were composed of a spherical to elliptical head, a cylindrical midpiece, and a lengthy flagellum. In conclusion, it was found that injection with LHRH–A₂ and MET improved the spermatogenic process in comparison to injection with CPE.  相似文献   

獭兔睾丸组织形态观察   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵鹂  程艳芬  文雪雪  田志英  贺俊平 《畜禽业》2010,(6):41-44

獭兔是一种典型的经济动物,它既是毛皮动物又可食用,普遍应用于人类生产生活。目前已有研究报道了多种哺乳动物生精周期研究,但很少有关于獭兔的报道。本实验对2只完全性成熟的健康獭兔进行睾丸结构,生精周期相对频率,支持细胞效率研究。獭兔睾丸经石蜡包埋,HE染色以便进行组织形态学观察。不同的生殖细胞组合分析显示30%的曲精小管显示两个或两个以上的生精上皮周期阶段。獭兔生精周期阶段频率(%)分别为:阶段1:(15.5±2);阶段2:(14.0±1);阶段3:(11.5±1);阶段4:(8.5±1);阶段5:(10.5±1);阶段6:(18.5±2);阶段7:(13.0±1);阶段8:(8.5±1)。支持细胞效率(圆形精子:支持细胞=7:1)。本研究结果表明獭兔的生精效率较其他哺乳动物高。  相似文献   

FGF9调节性腺分化研究进展     

廖冰  林秀坤 《动物医学进展》2009,30(5)

性别决定过程是双潜能胚胎发育成睾丸或卵巢的过程.通过小鼠基因敲除试验以及在遗传水平分析性反转病人证明该过程是由多个基因调控的.论文综述了睾丸发育通路中信号分子成纤维细胞生长因子9(FGF9)在性腺分化中的作用.FGF9基因参与调节早期睾丸发育的3个重要事件,为调节性腺体腔上皮细胞增殖,促进Sertoli前体细胞形成,调节中肾细胞迁移,影响睾丸索的形成,FGF9诱导FGFR2在核内定位,并维持Sox9的表达.  相似文献   

Study on Expression of Bcl-2 and PCNA Genes in Testicular Tissue of Chickens,Quails and Chicken-quail Hybrids     

ZHANG Mei  ZHOU Ling-ling  ZHANG Miao-miao  ZHONG Xin-xian  SHAO Jun  FAN Li-na  GENG Peng-rui  LI Yi-dan  LI Yan  LIAO He-rong 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2050-2056

In order to investigate the molecular mechanism of stunted growth testis of chicken (♂) and quail (♀) hybrids. 84 testicular tissue samples of New Roman cocks, male Korean quails and chicken-quail hybrids at different developmental stages were collected,the mRNA expression of Bcl-2 and PCNA genes in testicular tissue of cocks, quails and chicken-quail hybrids at different growth stages were detected using Real-time PCR. The results showed that the Bcl-2 and PCNA genes mRNA expression patterns in testes of chickens and quails at different growth stages were similar.The Bcl-2 gene was fluctuated in a whole, and decreased to the lowest value, then recovered rapidly and remained at a high level. The PCNA gene had a very significant peak value.Compared with the chicken and quail,the expression of Bcl-2 and PCNA genes mRNA in hybrids had no obvious change, which indicated that the pattern of the Bcl-2 gene regulation apoptosis in testis was different from chicken and quail at the hybrid testicular development process, and there was no obvious cell appreciation process.It was suggested that the molecular influencing factors of testicular dysplasia of chicken and quail hybrids were related to the abnormal expression of Bcl-2 and PCNA genes mRNA in testes.The results provided an important reference for the further study of the mechanism of testicular dysplasia between chicken and quail interspecific hybrids.  相似文献