苹果IRAP反应体系的建立和指纹图谱构建     

周军永  孙其宝  孙俊  王昆 《安徽农业大学学报》2010,37(3)

利用已获得的苹果Ty1-copia类逆转座子LTRs建立了苹果逆转座子间扩增多态性(IRAP)技术体系,对影响IRAP-PCR扩增结果的若干因子进行了研究.优化的反应体系包含:2.5 μL 10×buffer,50 ng模板DNA,2.5 mmol·L-1 Mg2+,0.2 mmol·L-1 dNTPs,0.4 μmol·L-1引物,1 U Taq DNA聚合酶,反应体积为25 μL;优化的PCR扩增程序为:94℃ 2 min; 94℃ 1 min,退火1 min,72℃ 2 min,循环35次;72℃延伸10 min;退火温度根据引物温度设定.该IRAP体系分别用于‘元帅'和‘富士'的短枝和着色芽变指纹图谱的分析,构建的指纹图谱可以作为芽变鉴定的依据,表明这些突变可能系逆转座子转座插入或逆转座子间重组所致.  相似文献   

香菇反转录转座子间扩增多态性（IRAP）PCR反应体系的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

肖扬 《中国农学通报》2009,25(7):47-51

摘 要：为了开发香菇反转录转座子间扩增多态性标记(IRAP),建立稳定的IRAP-PCR反应体系,本文对影响IRAP-PCR的主要因素进行了优化筛选。确定了最佳反应体系为：20μl反应体系中,包含30 ng模板DNA,0.30μmol/L引物, 0.3mmol/L dNTPs,2.0 mmol/L Mg2+及0.75UTaq酶。梯度PCR试验筛选得到的最佳退火温度为56.1℃。采用上述最佳反应体系和引物LTR1L-MarY1L对香菇18个菌株进行了IRAP-PCR扩增,验证了该体系的可靠性。  相似文献   

香菇反转录转座子间扩增多态性（IRAP）PCR反应体系的研究     

肖扬 《勤云标准版测试》2009,29(7)

为了开发香菇反转录转座子间扩增多态性标记(IRAP),建立稳定的IRAP-PCR反应体系,对影响IRAP-PCR的主要因素进行了优化筛选.确定了最佳反应体系为:20μl反应体系中,包含30ng模板DNA,0.30μmol/L引物,0.3mmol/L dNTPs,2.0 mmol/L Mg2+及0.75UTaq酶.梯度PCR试验筛选得到的最佳退火温度为56.1℃.采用上述最佳反应体系和引物LTR1L-MarY1L对香菇18个菌株进行了IRAP-PCR扩增,验证了该体系的可靠性.  相似文献   

部分柿属植物IRAP反应体系的建立和指纹图谱构建   总被引：14，自引：0，他引：14  

杜晓云  罗正荣 《农业生物技术学报》2006,14(6):931-936

为建立柿属(Diospyros)植物反转录转座子间扩增多态性(IRAP)技术体系,对IRAP分析中影响PCR扩增结果的若干因子进行了研究。确立了适合柿属植物IRAP分析的技术体系:20μL反应体系中,1×Buffer、模板DNA50ng、Mg2 2.0mmol/L、dNTPs0.25mmol/L、引物0.40μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0U,矿物油20μL;PCR扩增程序:95℃5min;95℃1min,56℃1min,升温速率 0.6℃/s,72℃2min,循环44次;72℃延伸8min。该优化体系在7种柿属植物33个基因型的I-RAP分析中获得较理想的扩增结果,扩增片段120～1500bp,不同种和柿种以下不同品种间扩增条带总数和带谱相同。每个基因型都有其独特的指纹图谱,可作为区分不同基因型的依据,尤其芽变品种的鉴别。  相似文献