猪传染性胃肠炎病毒S与M基因融合表达载体及IRES连接双基因共表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

贺小英  彭树英  杨瑞锋  张涌 《中国动物检疫》2006,23(6):34-37

目的:研究如何提高猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)中主要抗原基因S与M基因对猪传染性胃肠炎的免疫调节作用,进一步探究基因疫苗的有效开发途径。方法:通过两种方法应用牛β酪蛋白启动子构建S和M融合基因表达载体以及构建IRES连接M和S双基因共表达核酸疫苗载体。结论:成功构建好M和S融合基因表达载体及IRES连接的M和S双基因真核共表达载体,并为利用乳腺生物反应器生产可食性疫苗提供有效措施。  相似文献   

基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达IBDV VP2基因的研究     

何金娇  刘雪莹  吴云舟  郭茉  韩晓辉  尹杰超  安莹  任桂萍  李德山 《中国预防兽医学报》2013,35(6)

为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV) HLJ07株VP2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-VP2-IRES-VP2),同时构建表达单拷贝VP2基因的重组NDV (rClone30-VP2)作为对照.间接免疫荧光试验表明VP2蛋白在感染两种重组病毒的鸡胚成纤维细胞(DF-1)中得到表达.Real-time PCR检测结果表明rCIone30-VP2-IRES-VP2中VP2 mRNA转录水平明显高于rClone30-VP2.生长曲线分析表明,两株重组病毒株与亲本NDV LaSota (Clone30)株在细胞培养中可以同样稳定复制.重组病毒株在鸡胚中多次传代之后仍稳定表达VP2蛋白.本研究通过建立NDV的反向遗传操作系统构建了独立表达IBDV双拷贝VP2基因的重组NDV,并证明双拷贝基因的表达水平优于单拷贝基因,为提高重组NDV外源基因的表达量提供了新的思路.  相似文献   

狂犬病毒CVS株G基因和N基因共表达重组腺病毒载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

李江涛  殷相平  张金卫  丁农  柳纪省 《浙江农业学报》2011,23(3):0

通过引入内部核糖体进入位点序列,构建狂犬病毒G基因和N基因共表达的腺病毒载体。通过RT-PCR方法扩增得到RVG基因、N基因。N基因先亚克隆入pIRES质粒;G基因经Kpn I和Mlu I,pIRES-N质粒经Mlu I、Not I双酶切,回收目的基因后与经Kpn I和Not I双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒,RT-PCR 法检测狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段。该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR 法可检测到糖蛋白和核蛋白基因片段。试验成功构建了G和N双基因共表达重组腺病毒载体,为狂犬病活载体疫苗的研制提供了依据。  相似文献   

靶向口蹄疫病毒IRES区RNA干扰位点的选择及shRNA表达载体的构建与鉴定     

崔丽瑾  王兴龙  任林柱  李晓艳  郎需龙  张付贤  王英超 《动物医学进展》2010,31(3):1-5

以口蹄疫病毒WFL株为试验株,对口蹄疫病毒的IRES序列进行了保守性分析和RNA二级结构预测,推测高度保守的FMDV复制原点区域位于容易被siRNA结合的IRESRNA二级结构的环区,因此,在该区选择确定了2个siRNA干扰靶位,设计并合成能表达其小发夹结构shRNA的表达模板,克隆到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫病毒IRES区的siRNA真核表达系统,为进一步研究针对该区的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用打下了基础。  相似文献   

靶向IRES序列的siRNA对口蹄疫病毒体外增殖抑制效果     

崔丽瑾  王兴龙  任晓慧  任林柱  郎需龙  杨艳玲  李晓艳  卜朝阳 《中国兽医学报》2010,30(5)

为探讨靶向核糖体进入位点(IRES)区域的siRNA在真核细胞中对FMDV复制的抑制作用,对FMDV WFL株的IRES序列进行了保守性分析和二级结构预测,选择了靶向IRES保守的功能核心区的病毒复制原点附近的2个干扰靶位,设计并构建了shRNA真核表达质粒,转染到IBRS-2细胞后感染FMDV,通过双抗夹心ELISA和real-timeRT-PCR检测FMDV复制情况,结果表明,针对IRES区域的RNAi能够在一定程度上抑制FMDV的复制。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒主要抗原基因S与M双基因共表达载体的构建     

贺小英  彭树英  刘艳春  杨瑞锋  张涌 《中国兽医杂志》2007,43(11):6-9

研究如何提高猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）中主要抗原基因S与M对猪传染性胃肠炎的免疫调节作用,进一步探究基因疫苗的有效开发途径。方法：通过两种方法应用牛β-酪蛋白启动子构建TGEV的S和M融合基因表达载体以及构建IRES连接M和S双顺反子共表达核酸疫苗载体。结果成功构建好M和S融合基因表达载体及IRES连接的M和S双顺反子真核共表达载体,并为利用乳腺生物反应器生产可食性疫苗提供有效措施。  相似文献   

狂犬病毒CVS株G基因和IFN-a基因共表达重组腺病毒载体的构建     

李江涛  殷相平  柳纪省  胡永浩 《甘肃农业大学学报》2008,43(6)

通过RT-PCR方法扩增得到狂犬病毒G基因,PCR方法得到IFN-Αa基因并亚克隆入pIRES获得pIRES-a质粒.双酶切G基因和pIRES-a质粒并回收目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,再与pAdEasy-1质粒在BJ5183菌中同源重组产生腺病毒载体质粒.线性化后的重组腺病毒质粒转染人胚肾293细胞,通过观察报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒.结果表明:该重组病毒质粒经酶切鉴定与预期结果一致;转染293细胞后观察到绿色荧光蛋白的表达,说明成功构建了G和IFN-a双基因共表达重组腺病毒载体.  相似文献