玉米黄花叶病毒运动蛋白的原核表达纯化与抗血清制备     

马秋萌  刘玉姿  吴迪  李洪蕊  王颖  韩成贵 《植物保护学报》2023,50(2):343-349

为实现对玉米黄花叶病毒（maize yellow mosaic virus,MaYMV）的血清学检测,丰富该病毒的检测方法,将编码MaYMV运动蛋白（movement protein,MP）的基因连接到原核表达载体pDBHis-MBP上,将构建成功的原核表达质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli中诱导表达融合蛋白,将纯化后的融合蛋白对新西兰大白兔Oryctolagus cuniculus进行免疫并制备MaYMV MP多克隆抗血清,并采用Western blot对抗血清的效价、灵敏度和特异性进行检测。结果显示,利用成功构建的原核表达载体经诱导表达获得分子量大小约为62 kD的融合蛋白,纯化后对新西兰大白兔进行免疫获得MaYMV MP抗血清,该抗血清的效价为1∶128 000,灵敏度为1∶32,且该抗血清能够特异性地检测到本氏烟Nicotiana benthamiana中瞬时表达的MaYMV MP,而不与马铃薯卷叶病毒属Polerovirus及黄症病毒属Luteovirus的其他病毒发生血清学交叉反应,证明该抗血清具有良好的特异性。表明本研究制备的MaYMV MP抗血清能特异性...  相似文献   

基于抗原表位策略的苹果茎痘病毒抗血清的制备     

李丽丽  杨洪一  董雅凤  高源 《植物病理学报》2010,40(4):357-363

苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)是一种严重危害果树生产的潜隐性病毒,但缺乏实用的ASPV抗血清。应用不同生物信息学软件对ASPV外壳蛋白不同区域的抗原指数、蛋白二级结构中α螺旋、β片层、β转角、无规则卷曲结构、亲水性、可塑性(Flexibility)和表面可及性(Surface probability)进行了分析。根据抗原表位主要分布在β转角结构和无规则卷曲区域、亲水性和表面可及性参数较高的特点,综合分析预测ASPV外壳蛋白抗原表位区可能位于N端6-20、100-114、400-414位氨基酸残基附近。通过合成2条多肽(CRGYEEGSRPNQRVLP、CTGGKIGPKPVLSIRK),与载体蛋白偶联后免疫动物,最后得到了2份抗血清(编号为1468和1469)。制备的抗血清可与ASPV外壳蛋白基因原核表达产物产生免疫反应。应用此抗血清检测苹果样品,抗血清1468检测结果与RT-PCR检测结果一致,而抗血清1469仅能检测到部分样品。  相似文献   

兽用生物制品的运输、贮存与使用     

张振兴  李玉峰  蒋文明 《经济动物学报》2006,10(2):63-65

对兽用生物制品的命名作了概述,并对免疫预防用制品、诊断用制品、治疗用制品的运输、贮存与使用分别进行了阐述,同时对改善我国兽用生物制品的监管提出了建议。  相似文献   

Production of polyclonal antiserum against recombinant VP28 protein and its application for the detection of white spot syndrome virus in crustaceans     

Yoganandhan K  Syed Musthaq S  Narayanan RB  Sahul Hameed AS 《Journal of fish diseases》2004,27(9):517-522

The VP28 gene of white spot syndrome virus (WSSV) was cloned into pRSET B expression vector. The VP28 protein was expressed as a protein with a 6-histidine taq in Escherichia coli GJ1158 with NaCl induction. Antiserum was raised against this recombinant-VP28 protein in rabbits and it recognized VP28 protein in naturally and experimentally WSSV-infected shrimp, marine crabs, freshwater prawns and freshwater crabs. The antiserum did not recognize any of the other known WSSV structural proteins. Various organs such as eyestalks, head muscle, gill tissue, heart tissue, haemolymph, tail tissue and appendages were found to be good materials for detection of WSSV using the antiserum and detection of WSSV was successful in experimentally infected Penaeus monodon and P. indicus at 12 and 24 h post-infection (p.i.), respectively. The antiserum was capable of detecting WSSV in 5 ng of total haemolymph protein from WSSV-infected shrimp.  相似文献   

甘蔗黄叶病毒P0基因的克隆与原核表达及抗血清制备     

邹游兴  刘向蕊  王洪星 《中国甜菜》2014,(2):1-3,9

根据已发表ScYLV-P0基因系列设计特异性引物,应用RT-PCR技术从甘蔗病叶的mRNA扩增得到目的DNA片段.以pET32a（＋）为原核表达载体,构建重组表达质粒pET32a-P0.经过双酶切鉴定和DNA测序后,将重组表达质粒转入大肠杆菌BL21 （DE3）pLySs,在30℃培养条件下IPTG诱导表达.通过SDS-PAGE电泳检测融合蛋白表达情况.表达结果显示,在该表达系统中,融合表达蛋白P0是以包涵体形式的蛋白存在;P0融合蛋白大小约45kDa,与P0开放阅读框的理论推算值29.991 kDa加上载体自身蛋白约18 kDa相符,用Ni2＋-NTA琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白,免疫家兔制备出抗血清,通过酶联法（ID-ELISA）测定本实验制备的ScYLY-P0抗血清工作浓度为1：25000.  相似文献   

稻瘟菌侵染诱导的水稻过氧羟基脂肪酸羟化环氧化酶的抗血清制备     

苏生昌  张淑平  范军 《植物病理学报》2000,30(3):207-212

 通过选择性抽提、盐析、阴阳离子交换柱层析等步骤从非亲和性稻瘟菌侵染的120g稻叶中获得了诱导性过氧羟基脂肪酸羟化环氧化酶(POG)的电泳纯蛋白250μg。利用这些纯化蛋白,制备了POG的抗血清。点免疫杂交结果表明,该抗血清效价大于1:5000,其抗原检测灵敏度可达0.05ng,并具有较好的特异性。蛋白印迹结果显示,稻瘟菌侵染可诱导POG在水稻细胞膜上的累积。  相似文献   

羔羊轮状病毒的诊断与防治研究          下载免费PDF全文

周尚志  程庆华  牛小迎  叶成玉  张显玉  裴青生 《西北农业学报》1993,2(4):89-93

用分离培养的羔羊轮状病毒进行了高免血清、荧光抗体、酶标记抗体、RNA核酸电泳等的制造和研究,对我省羔羊轮状病毒鉴定为亚群Ⅰ,长型.用高免血清治疗羔羊、犊牛轮状病毒性腹泻疗效显著.初步认定羔羊轮状病毒与犊牛轮状病毒之间有交互抗原.对分离到的病毒进行了长期的细胞培养继代,并经过较长时间的低温处理,经用初生羔羊口服免疫,试验结果表明,弱毒疫苗对初生羔羊具有较好的免疫力.  相似文献   

大鼠脊髓P物质对细胞免疫调节作用的研究     

王伟  徐承焘 《湛江医学院学报》1997,15(4):323-324,330

目的：观察大鼠脊髓Ｐ物质对细胞免疫水平的影响，方法：两组新生大鼠分别皮下注射辣椒素（ＣＡＰ）和Ｐ物质抗血清，成年大鼠则于脊髓蛛网膜下腔注射，用丝裂原激活的大鼠脾细胞方法测定了淋巴细胞的白细胞介素－２（ＩＬ－２）水平。结果：大鼠皮下及脊髓蛛网膜下腔各分别注射ＣＡＰ，Ｐ物质抗血清后，ＩＬ－２的水平较对照组显著升高（Ｐ〈０．０１）。结论：新生大鼠（皮下）与成年大鼠（蛛网膜下腔）注射ＣＡＰ或Ｐ物质抗血清垃  相似文献   

拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记     

马立安  江涛  张忠明 《华中农业大学学报》2007,26(4):439-442

将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。  相似文献   

苹果茎沟病毒的分离纯化及血清学检测   总被引：9，自引：0，他引：9  

洪霓  魏梅生 《中国农业科学》1997,30(5):6-12

 从苹果样品中分离到苹果茎沟病毒（ASGV）,汁液摩擦接种该病毒可侵染昆诺藜（Chenopodium quinoa）、苋色藜（C.amaranticolor）、心叶烟（Nicotiana glutinosa）、灰藜（C.niurale）、菜豆（Phaseolus vulgaris "pinto"）和西方烟（N.accidentalis"37B"）。在昆诺藜叶片汁液中,该病毒体外存活期为3d左右（25℃）,热钝化点60～65℃（10min）,稀释限点10#+(-4)。提纯病毒在-20℃下,存活期为6个月以上。提纯病毒液A260/A280=1.18。病毒粒子呈线状,大小为620～680nm×11～12nm。衣壳蛋白分子量为31.0kD。用提纯病毒免疫大耳白兔,所获抗血清用于检测提纯病毒样品和感染ASGV的昆诺藜叶片,其效价毛细管微量沉淀反应法为1:512,酶联免疫吸附法为1:10#+4以上。用该抗血清可检测出感染ASGV的苹果试管苗和田间生长植株叶片。  相似文献