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1.
根据Gen Bank中大鲵虹彩病毒主衣壳蛋白MCP(major capsid protein,MCP)基因序列(序列号:KF512820),设计一对特异性引物,以大鲵虹彩病毒贵州分离株基因组DNA为模板,PCR扩增大鲵虹彩病毒MCP基因并测序,与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因进行比对,然后将其亚克隆到原核表达载体p ET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行Western blot分析。结果显示:PCR扩增出长度为1 392 bp的片段,与Gen Bank中大鲵虹彩病毒MCP基因核苷酸序列相似性为99.7%~99.9%,SDSPAGE电泳显示该重组蛋白的相对分子质量约为67×103。免疫原性检测结果表明,该重组蛋白可与兔抗大鲵虹彩病毒阳性血清特异性反应,具有免疫原性。 相似文献
2.
Qi-Ya Zhang Zhe Zhao Feng Xiao Zheng-Qiu Li Jian-Fang Gui 《Aquaculture (Amsterdam, Netherlands)》2006,251(1):1-10
Three Rana grylio virus (RGV) isolates and lymphocystis disease virus (LCDV-C) were molecularly characterized by antigenicity comparison, Western blot detection of viral polypeptides, restriction fragment length polymorphism analysis of viral genomes, and MCP sequence analysis. Significant antigenicity differences existed among the three RGV isolates and LCDV-C. Western blot detection indicated that the viral polypeptides of three RGV isolates could be recognized by the anti-RGV9807 serum, whereas no bands were observed in the LCDV-C, and significant differences exist among the band patterns of three RGV isolates. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis was performed by digesting genomic DNA of the four iridovirus isolates with restriction endonucleases HindIII, KpnI, XbaI and BamHI. On the whole, obvious discrepancies existed between LCDV-C and RGV isolates, and some significant band pattern differences were also revealed between RGV9808 and RGV9506 (or RGV9807) in the profiles of restriction endonucleases XbaI, KpnI and BamHI. PCR amplification and sequence analysis of MCP gene sequence further revealed their phylogenetic relationship among the three RGV isolates, LCDV-C and other iridoviruses. RGV9506, RGV9807 and RGV9808 are clustered together with other ranaviruses, such as FV3, BIV, TFV and ENHV, although the RGV9808 is more close to EHNV than to other ranaviruses. Additionally, LCDV-C is clustered with LCDV-1, the type species of genus Lymphocystisvirus. The current study provides clear evidence that significant genetic difference exists among the three RGV isolates. Therefore, further work on comparative genomic studies will contribute significantly to understanding of their taxonomic position and pathological mechanism. 相似文献
3.
大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：2，他引：2
利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp 的片段, 克隆到 pMD19-T载体上, 构建重组质粒 pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后, 以10倍梯度稀释 pMD19-T-MCP重组质粒, 作为标准模板进行 TaqMan实时荧光定量PCR扩增, 制作标准曲线, 建立了大鲵虹彩病毒的 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系, 且线性范围宽, 相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示, 该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性, 与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应, 特异性好, 检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数, 约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸, 较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强, 对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。 相似文献
4.
[Objective] To optimize the prokaryotic expression of MCP gene of red-spotted grouper nervous necrosis virus. [Method] The MCP gene was amplified from red-spotted grouper nervous necrosis viral genome by RT-PCR. The recombinant expression vector pRSET A-MCP was constructed and transformed into BL21(DE3)plysS to express proteins with induction in different media, at different pH, or at different temperatures. [Result] The expression level of recombinant bacteria reached a peak with induction under the following condition: SOB or LB medium, pH 7.0, 37 ℃ while the fusion protein was about 44.5 kD in molecular weight. [Conclusion] This study provided a basis for the development of RGNNV-MCP vaccine. 相似文献
5.
以红阳、华优和徐香3种猕猴桃果实为材料,用0.5 μL·L-1的1 甲基环丙烯（1 MCP）在20 ℃下处理果实24 h,然后将其在0 ℃下贮藏90 d,研究1 MCP处理对其贮藏过程中冷害的影响。结果表明,0.5 μL·L-1的1 MCP处理可以延缓和减轻美味猕猴桃徐香冷害的发生,但却加重中华猕猴桃红阳冷害的发生,而对中华猕猴桃华优冷害的影响不显著。0.5 μL·L-1的1 MCP处理降低徐香果实中丙二醛（MDA）含量,显著抑制乙烯释放高峰值,却提高红阳MDA含量和乙烯释放峰值;同时1 MCP处理显著降低红阳贮藏期间的呼吸速率,但对华优和徐香贮藏后期呼吸速率的影响不明显。 相似文献
6.
1-MCP处理对桃冷藏期间品质和生理特性的影响 总被引：12，自引：1，他引：12
秦王”桃采收后分别用不同浓度1-MCP处理,然后置于(0±1)℃冷库中贮藏。结果表明:1-MCP处理对贮藏期果实的硬度、可溶性固形物含量无显著影响。经处理的果实在贮后20天果皮细胞膜透性开始异常增加。10nL/L和30nL/L1-MCP处理的果实比对照提前5天出现了呼吸高峰和乙烯释放高峰;500nL/L的处理抑制了果实的呼吸作用,与对照相比大幅度降低了乙烯峰值,在相同贮藏时间多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性也显著降低(p<0.05),表明500nL/L的1-MCP处理能有效地抑制果肉褐变,延长果实贮藏时间。 相似文献
7.
转人MCP和CD59双基因小鼠的制备 总被引：4，自引：0，他引：4
采用显微混合注射的方法制备转人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)双基因小鼠,共注射478枚受精卵,移植于21只受体,其中14只受孕,8只受孕小鼠中途流产,从6只受孕小鼠获得18只仔鼠,经检测,其中9只仔鼠单基因阳性(50％),6只仔鼠双基因阳性(33．3％)。结果表明：通过显微混合注射的方法可以获得转人MCP和CD59双基因小鼠。 相似文献
8.
1-MCP对粉红女士苹果采后生理的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
以粉红女士苹果为试验材料,研究了500nL/L浓度的1-MCP(1-甲基环丙稀)对粉红女士苹果在贮藏期和室温条件下果实硬度、可滴定酸含量及可溶性固形物含量的影响。结果表明,贮藏150d时,处理果实的硬度、可滴定酸含量和可溶性固形物含量分别由入贮时的9.2kg/cm2,6.709g/L和14.0%下降到8.6kg/cm2,5.194g/L和13.5%,下降幅度明显低于对照果实。由此可见,500nL/L的1-MCP处理可显著抑制粉红女士苹果在贮藏期和室温条件下的果实硬度、可滴定酸含量及可溶性固形物含量下降,其抑制作用与呼吸速率下降和乙烯产生减少有关。粉红女士苹果在0℃下可以贮藏5个月,1-MCP处理可显著改善其贮藏品质。 相似文献
9.
Two japonica rice varieties, Longjing 20 (more tillers and curved panicle type, MCP) and Longjing 21 (few tillers and half erect panicle type, FEP), were used to study the effects of row-spacing on can... 相似文献
10.
大鲵虹彩病毒流行株的分离及其主衣壳蛋白编码基因序列比较分析 总被引：1，自引：1，他引：0
大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV)是近年中国大陆新发现的引起人工养殖大鲵(Andrias davidianus)大规模死亡的病毒病原。为了揭示大鲵虹彩病毒流行株的基因型差异, 本研究对2010–2012年采集自全国不同大鲵养殖区域的患虹彩病毒病的大鲵样本进行了分子检测、病毒分离培养以及病毒主衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)基因测序与比对分析。结果显示, 采自陕西、湖北、湖南、浙江、江西、福建等省的10个样本检测为阳性, 通过细胞培养获得10株病毒流行株。对该10株流行株MCP基因的测序与比对分析发现, 核苷酸序列相似性达到99.7%~100%, 其推测的氨基酸序列无明显差异, 证实中国大鲵虹彩病毒流行株属同一基因型。系统进化树分析结果表明, 所选大鲵虹彩病毒与蛙病毒分别聚为一枝, 但其亲缘关系较近。本研究结果旨为大鲵虹彩病毒病的疫苗研制及其免疫防控技术研究奠定基础。
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