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【目的】研究溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的影响,为溶葡萄球菌素的食用安全性评估提供参考。【方法】将24只7周龄ICR小鼠随机分为3个试验组和对照组,3个试验组分别提供溶葡萄球菌素含量为1 μg/mL（低剂量）、5 μg/mL（中剂量）和15 μg/mL（高剂量）的饮水10 mL/(只·d),于饮用第0(饮用前),1,3,7,14,21天以及停饮第3,7,14天采集小鼠新鲜粪便样品,采用PCRDGGE技术检测小鼠肠道菌群结构变化。【结果】DGGE图谱显示,各组小鼠试验前后不同时间肠道内的优势菌种相似;经UPGMA聚类分析,与对照组相比,低、中剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构影响较小,高剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构影响较大;差异性分析结果显示,试验组饮用各阶段带谱与试验前的相似性与对照组相应阶段的相似性差异均不显著（P＞0.05）,溶葡萄球菌素低、中和高剂量组在停饮后第7天带谱与饮用前的相似性分别达到了70.8%,66.9%和63.8%;对图谱中主要条带进行测序和比对分析,结果表明,高剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道中Lactobacillus taiwanensis和1株不可培养细菌有促进作用。【结论】溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的改变具有浓度依赖性,且停饮后小鼠肠道菌群结构有一定程度的恢复。 相似文献
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本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞.本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6 kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6 kb的3′侧翼区(poly A)序列作为调控序列,制备成含有绿色荧光和新霉素筛选标记的牛乳腺特异表达载体,经PCR和酶切鉴定正确后,用转染试剂FuGene HD反复转染牛pEPB乳腺上皮细胞3～5次,用催乳素诱导后,经免疫荧光分析,检测目的蛋白的表达.然后,用电转染法转染牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选得到阳性细胞后,把阳性细胞扩大培养并提取其基因组,因为溶葡萄球菌素基因是外源基因,经PCR及Southern blot 检测来确定目的基因是否已经整合到细胞的基因组上.结果表明,溶葡萄球菌素基因在牛乳腺细胞中得到了表达,并整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组中,得到了转溶葡萄球菌索基因的核供体细胞.结果显示,本研究所获得的转基因牛胎儿成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究. 相似文献
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研究了浓度、温度、pH值、时间和牛血清白蛋白(BSA)对复合溶葡萄球菌酶溶液杀菌效果的影响以评价其在兽用领域使用的有效性。结果表明,在0～40℃、pH值4～8下用复合溶葡萄球菌酶溶液处理1 min以上对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、链球菌、宠物源耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌(MRSP)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的杀菌率均在99.99%以上,当BSA浓度小于20%时对杀菌效果无明显干扰;现场消毒3～5喷(0.6～1.0 mL)使用10 min后对比格犬毛发表面自然菌及MRSP的杀菌率在99.9%以上。 相似文献
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试验采用重组溶葡萄球菌酶探讨了对小鼠试验性乳腺炎的治疗效果.利用微量肉汤稀释法测定了重组溶葡萄球菌酶时乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).将18只泌乳8～10 d的BALB/C母鼠随机分成正常组、阳性对照组和试验组.阳性时照组和试验组母鼠经第4对、第5对乳腺乳头管注入50μL 2.0x105CFU的细菌悬液.试验组攻菌出现症状后,每个乳腺经乳头管注入1 U·mL-1的重组溶葡萄球菌酶稀释液50μL,间隔12 h 1次.观察小鼠的临床症状,测定体温、血常规等指标.接菌66h后,颈静脉放血处死小鼠,取小鼠乳腺进行细菌计数和病理组织切片制作.结果显示,重组溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌的MIC值为0.001 U·mL-1,MBC值为0.063U·mL-1.病理组织观察显示,正常组的腺泡结构完整,而阳性对照组的乳腺组织局部被破坏,间质增宽,炎性细胞浸润严重,试验组的组织结构基本正常,有轻度充血.说明重组溶葡萄球菌酶能有效地减少细菌感染,降低组织的损伤程度,对乳腺有一定地保护作用. 相似文献
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【目的】制备溶葡萄球菌素(lys)的多克隆抗体,为检测其在转基因细胞、胚胎及转基因动物中的表达奠定基础。【方法】以含有lys基因成熟肽序列的PEPB质粒为模板,经PCR扩增,构建pET28a-Ly原核表达载体,并以其转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达并纯化蛋白后,常规免疫家兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性。【结果】构建的原核表达载体pET28a-Ly经IPTG诱导6h后即可高效表达lys蛋白,蛋白经纯化后,其质量浓度可达到3.05mg/mL;抗体经ELISA检测,效价为1∶27 000,West-ern blot检测结果表明,抗体的特异性较好。【结论】成功构建了lys原核表达载体,所制备的lys多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性。 相似文献
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重组溶葡萄球菌酶对奶牛子宫内膜炎的疗效研究 总被引：3，自引：2，他引：1
为研究重组溶葡萄球菌酶对奶牛子宫内膜炎的疗效,以青霉素钠、土霉素为对照药物,子宫内灌注给药,分别在河北、内蒙古、广州、上海奶牛场试验,共治疗急、慢性子宫内膜炎病例359头,抽检249头奶牛子宫分泌物进行细菌学分离鉴定与统计分析。结果表明,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、化脓棒状杆菌是4种检出率较高的病原菌。重组溶葡萄球菌酶治疗组与土霉素、青霉素钠比较,按400、800、1200U／次的三个浓度剂量治疗,隔日投药1次,连续用药3次,800、1200U／次的浓度剂量显效率超过80％,显著优于青霉素钠的疗效（P〈0．01）,与土霉素注射液组相当。追加用药次数可进一步提高奶牛子宫内膜炎的痊愈率。重组溶葡萄球菌酶能有效治疗由金黄色葡菌球菌、链球菌、化脓棒状杆菌等革兰氏阳性菌感染的子宫内膜炎,治愈后受孕率在70％左右。尤其是对抗生素治疗无效的慢性子宫内膜炎同样具有很好的疗效。因此,用重组溶葡萄球菌酶治疗奶牛子宫内膜炎安全、高效。 相似文献
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重组溶葡萄球菌酶的致突变实验 总被引：1，自引：0，他引：1
实验用ICR小鼠经口罐胃染毒（骨髓细胞微核实验和精子畸形实验的剂量分别为2500、5000、10000mg·kg^-1）,取其股骨或睾丸组织常规制片,观察分散良好的中期分裂相鼠伤寒沙门氏菌回复突变（Ames）试验采用平板掺入法（剂量分别为0．01、0．04．0．2、1．00、5．00μg·皿^-1）,探讨了重组溶葡萄球菌酶的致突变性;预防其遗传危害性和潜在致癌作用的可能性。结果表明：小鼠骨髓、睾丸细胞染色体畸变实验显示：重组溶葡萄球菌酶给药组与阴性对照组比较,差异无显著性（P〉0．05）,Ames试验显示各菌株的各测试酞度的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍。由此证明在本实验条件下,重组溶葡萄球菌酶无致突变性。 相似文献
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重组溶葡萄球菌酶对奶牛乳房炎的疗效研究 总被引：1，自引：1，他引：0
以85头患乳房炎奶牛共104个乳区为研究对象,随机分为4组,每组26个,分别用重组溶葡萄球菌酶粉低（200U／乳区）、中（400U／乳区）、高（800U／乳区）三个剂量,对照组为青霉素G钠（160万IU／乳区）,每天早晚挤奶后乳池灌注给药,共4d,研究不同剂量重组溶葡萄球菌酶对奶牛乳房炎的治疗效果。试验结果显示,低、中、高剂量重组溶葡萄球菌酶均能有效清除感染乳区的链球菌、葡萄球菌、化脓隐秘杆菌等G^＋菌,大幅降低牛奶中的白细胞数,提高日产奶量。其中低剂量组对隐性乳房炎、临床型乳房炎的有效率和治愈率略优于青霉素G钠（P〉0．05）;中、高剂量对隐性乳房炎、临床型乳房炎的有效率和治愈率显著优于青霉素G钠（P〈0．05）;中、高剂量的疗效相当（P〉0．05）。重组溶葡萄球菌酶是一种很好的治疗奶牛隐性乳房炎和临床乳房炎备选药物。 相似文献
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N Craven M.R Williams J.C Anderson 《Comparative immunology, microbiology and infectious diseases》1982,5(4):447-456
The effects of pretreatment of Staphylococcus aureus with subMIC or 10 × MIC amoxycillin, cloxacillin and nafcillin on subsequent killing by bovine neutrophils or sensitivity to lysostaphin were examined in vitro, using penicillinase positive and negative strains. All penicillins increased the susceptibility of S. aureus to bovine neutrophils; with amoxycillin this was most marked with the penicillinase negative strain. Cloxacillin pretreatment was significantly more effective than nafcillin or amoxycillin in some tests and equally effective in others. The sensitivity of S. aureus to lysostaphin was increased following cloxacillin or nafcillin exposure. In a mouse model of mastitis, more cloxacillin and nafcillin-treated S. aureus (at 1/4 MIC) were killed than untreated bacteria 1 hr after infection but by 4 hr no differences were found. No differences were seen after intramammary infection with 10 × MIC penicillin-treated S. aureus. In glands with established chronic mastitis both cloxacillin and nafcillin at high doses failed to kill staphylococci. These findings indicate that prior exposure to penicillins increases staphylococcal susceptibility to killing by neutrophils but following phagocytosis, intracellular bacteria are protected from the lethal action of penicillins. 相似文献
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