家蚕泛素结合酶新基因的克隆与基因组结构及5′调控区分析     

徐豫松  王华兵 《蚕业科学》2005,31(4):439-443

在家蚕丝腺cDNA文库测序过程中,发现一个编码家蚕泛素结合酶的EST序列,利用3′RACE方法克隆了一个新的家蚕泛素结合酶基因cDNA全长序列,命名为BmUCE2 I(GenBank登录号为DQ219874)。家蚕BmUCE2 I基因全长cDNA由465 bp的开放阅读框序列(ORF)、97 bp的5′端非翻译区序列(5-′UTR)和237 bp的3′端非编码区序列(3-′UTR)组成,其编码的154个氨基酸与其他真核生物间具有较高的同源性。利用BmUCE2 I的EST片断作探针,通过筛选家蚕噬菌体基因组文库,获得了家蚕BmUCE2 I基因组序列和5′调控序列。BmUCE2 I基因由4个外显子和3个内含子组成,在5′端上游调控区域没有类似TATA盒元件,但在-219~-268 bp的区域存在一个50bp的启动子序列,此外还存在CF2-Ⅱ、FTZ、DFD、BRCZ2、DL、STAT、PRD-HD等多个转录因子结合位点。家蚕泛素结合酶新基因的克隆、基因结构及5′调控区的分析为进一步研究泛素蛋白水解酶复合通路相关基因的调控规律提供了重要依据。  相似文献   

植物基因启动子的克隆方法及其应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

尹辉　李丹张毅  李秋莉 《分子植物育种》2006,4(Z1):85-91

植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点,启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR的克隆启动子技术,如载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。本文着重介绍了几种植物基因启动子的克隆方法,分析了它们的优缺点,并展望了今后的研究前景。  相似文献   

工能基因组学:T-DNA介导的基因诱捕和植物基因鉴定(英文)   总被引：2，自引：0，他引：2  

唐巍 《林业研究》2001,12(1):1-8

拟南芥菜、水稻、蕃茄、土豆、玉米、小麦和大豆的全基因组测序为植物细胞和发育生 物学研究提供了许多有用的信息。基因组学的中心任务是利用这些信息去探索蛋白质的功能 和鉴定与发育有关的重要基因。尽管依赖于毁坏基因和产生可识别的突变表型的经典遗传学 方法仍然是极为成功的基因鉴定方法，借助于报告基因结构，随机插入植物基因组的T-DNA 介导的基因诱捕正发展成为植物细胞和发育生物学研究的极强有力的技术。本文描述了基因 诱捕、启动子诱捕和增强子诱捕在植物生物学中的应用，并且希望这些基因鉴定方法有助于 植物分子生物学家和生物技术工作者的研究。  相似文献   

小麦BES1转录因子全基因组鉴定与分析     

卢晨  李寒  王书平  张迎新  尹军良  马东方  方正武 《西北农业学报》2021,30(3):365-376

为了解小麦中 BES1基因家族功能,根据已公布的小麦基因组信息(IWGSC v1.1),对小麦 BES1基因家族进行全基因组鉴定。根据已报道的 BES1基因,采用同源比对法检索小麦基因组中的 BES1家族基因,pfam鉴定并进行编号,通过ExPASy Proteomics Server预测小麦 BES1氨基酸序列的基本信息,利用Cell-PLoc进行亚细胞定位预测,采用MEGA 7软件构建进化树,利用R软件包pheatmap绘制启动子的热图和circlize绘制同源关系图谱。结果表明,小麦共有15个 BES1基因,被分为4组;小麦 BES1编码的蛋白质等电点为8.13～9.4,不稳定指数为50.78～69.99;小麦 BES1启动子区域一共含有838个顺式元件,471(56.2%)个与生长发育有关,201(24%)个与非生物/生物胁迫有关,166(19.8%)个与激素反应有关;与普通小麦相关的同源物共52对,有13对(25%)旁系同源物和39对(75%)直系同源物。表明小麦 BES1基因家族包括15个成员,全部为碱性蛋白质和不稳定蛋白质,小部分(13对25%)来源于自身的进化,大部分(39对75%)来源于3种亚基因组供体小麦。  相似文献   

马银花愈伤组织RoWUS基因及其启动子的克隆与表达分析     

匡华琴  刘生财  陈裕坤  赖钟雄 《热带作物学报》2014,35(10):1984-1991

WUSCHEL(WUS)基因是植物干细胞的标志基因。采用同源克隆法结合RACE技术从马银花愈伤组织中克隆得到Ro WUS c DNA全长序列,采用染色体步移法克隆得到该基因的启动子序列,登录号分别为KF365488、KF861578。马银花Ro WUS c DNA全长1 123 bp,编码302个氨基酸;DNA序列2 001 bp,包含2个内含子和3个外显子;启动子序列3 122 bp。生物信息学分析表明:Ro WUS亚细胞定位于细胞核,是不稳定的亲水蛋白,无信号肽,具有跨膜结构,包含homeodomain功能位点。系统进化树分析结果表明:Ro WUS单独形成一个分支,与葡萄、大豆和苜蓿的亲缘关系最近。对Ro WUS的启动子进行分析表明,该启动子除了含有丰富的TATA-box和CAAT-box等基本元件以外,还含有多个光响应元件、逆境胁迫响应元件、激素应答元件和其他功能元件。q PCR结果表明:Ro WUS基因在马银花愈伤组织不同生长时期中呈先上升后下降的趋势,在第5个继代周期时表达量最高。外源赤霉素和脱落酸浓度为15 mg/L时表达量最高,说明Ro WUS基因在该浓度时对赤霉素和脱落酸的响应最强。  相似文献   

水稻OsGL1-2基因反义表达载体的构建     

黄丹莹  叶能辉  庄楚雄 《安徽农业科学》2014,42(36):12818-12820

应用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增水稻OsGL1-2基因反义片段及基因自身的启动子,并分别克隆到pUC19克隆载体上,得到含有OsGL1-2启动子＋OsGL1-2反义片段的中间载体.对重组子进行PCR检测和酶切分析并测序,结果表明,长度分别为417和2 199bp.将OsGL1-2启动子＋OsGL1-2反义片段克隆到植物表达载体pCambia1380多克隆位点,构建了该基因的植物反义表达栽体pCamGL1-2.  相似文献   

木薯细胞壁酸性转化酶MeCWINCV5基因启动子的克隆和序列分析     

夏文睿  刘姣  胡艳平等 《安徽农业科学》2014,(11):3179-3181,3215

[目的]了解MeCWINCV5在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中的功能.[方法]采用PCR方法从木薯基因组中分离MeCWINCV5基因启动子序列,考察MeCWINCV5对植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答的影响.[结果]分析显示启动子的长度为1170bp,合有TATA box和CAAT box等多个典型的真核生物启动子基本元件元件,还存在大量逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件,如HSE、MBS、SARE、GARE-motif和TATC-box等多个与植物逆境胁迫相关的元件.[结论]MeCWINCV5基因启动子与逆境胁迫有关,在木薯抵御逆境胁迫的生理过程中具有重要作用.  相似文献   

Repression of SFRP5 promoter activity by hepatitis B virus X protein     

CHEN Lin-lin  XIE Qing  SHAN Xiao-liang  QUAN Hui-qin  CHEN Qing-mei  ZHOU Fan  NIE Dan  TANG Ni 《园艺学报》2013,29(2):200-204

AIM: To investigate the molecular mechanism that hepatitis B virus X protein (HBx) inhibits the promoter activity of secreted frizzled-related protein 5 (SFRP5). METHODS: Serial truncated fragments of SFRP5 promoter were amplified and cloned into luciferase reporter vector pGL3-Basic. LO2 cells were transfected with recombinants, and then infected with the adenoviral vector expressing HBx protein (Ad-HBx) or the analogous adenovirus expressing green fluorescent protein (Ad-GFP) for control. The infection efficiency was examined under a fluorescence microscope and the activity of SFRP5 promoter was measured by luciferase assay. RESULTS: Truncated fragments of SFRP5 promoter were successfully constructed. Compared with the pGL3-Basic control, the luciferase activity was 6.32±0.04 of the -478 bp~+47 bp fragment, 5.79±0.32 of the -811 bp~+47 bp fragment, 3.59±0.34 of the -1 235 bp~+47 bp fragment, 3.86±0.39 of the -1 677 bp~+47 bp fragment and 3.26±0.42 of the -2 072 bp~+47 bp fragment, respectively. Overexpression of HBx inhibited the activity of SFRP5 promoter. The average inhibitory rates were 44% for -478 bp~+47b, 46% for -811 bp~+47 bp, 28% for -1 235 bp~+47 bp, 24% for -1 677 bp~+47 bp and 40% for -2 072 bp~+47 bp, respectively. CONCLUSION: HBx suppresses the activity of SFRP5 promoter, leading to down-regulation of SFRP5 expression.  相似文献   

根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种   总被引：31，自引：0，他引：31  

师校欣  王斌  杜国强  翁曼丽  高仪  马宝□  邵建柱  贾建航 《园艺学报》2000,27(4):282-284

研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动的豇豆胰蛋白抑制剂基因（ＣｐＴｌ）转入富士、齐纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中，经卡那霉素抗性、ＰＣＲ、点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交检测证明了４个品种均获得转化再生植株，现已移栽成活。  相似文献   

促食物质和阻食物质相互作用对家蚕摄食性的影响   总被引：2，自引：2，他引：0  

崔为正  尚金燕  刘训理  邹凤竹  路海 《蚕业科学》2002,28(1):35-38

以 4龄起蚕取食饲料一定时间后的排粪量为指标 ,探讨了促食性物质和阻食性物质对家蚕摄食性的影响。结果表明 ,将桑叶粉、蔗糖、肌醇等促食物质同时添加到饲料中 ,对家蚕的取食有协同促进作用。脱脂大豆粉、柠檬酸等摄食抑制物质的阻食作用也具有累加性。而将促食物质和阻食物质混合添加时 ,二者表现为相互抑制效应。添加促食剂是减弱或消除阻食性物质的摄食抑制作用的有效途径。  相似文献