蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测     

毛玉梅  李琴  付鸣佳  金华燕  沈俊良  钟雪晴 《华北农学报》2016,(4):112-118

为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析,表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域(143~429)和1个前体蛋白转化酶P功能域(514~600),符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射,Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果,即在持续的蓝光照射48~50 h时,出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。  相似文献   

枯草杆菌发酵对何首乌抗氧化成分及肝癌细胞抗增殖作用的影响          下载免费PDF全文

范琼  赵敏  金明坤  韩丙军 《南方农业学报》2020,51(8):1932-1938

[目的]探讨何首乌经枯草杆菌发酵后主要抗氧化成分及其对肝癌细胞抗增殖作用效果的变化,为进一步研究何首乌发酵炮制方法及开发何首乌产品提供科学参考.[方法]将生何首乌用枯草杆菌发酵处理后,测定生品和发酵品的游离型蒽醌、结合型蒽醌和总多酚含量等成分的变化,并对比何首乌生品和发酵品对肝癌细胞HepG2抗增殖作用的变化.[结果]何首乌生品和发酵品总游离型蒽醌含量分别为1.56和1.60 mg/g,总结合型蒽醌含量分别为1.24和0.79 mg/g,何首乌经枯草杆菌发酵后结合型蒽醌含量极显著下降(P<0.01,下同).何首乌生品和发酵品水提取液的总多酚含量分别为44.88和74.01 mg/g,乙醇提取液的总多酚含量分别为61.84和93.86 mg/g,何首乌经枯草杆菌发酵后总多酚含量极显著增加.0.025 g/L何首乌生品对肝癌细胞HepG2作用24 h后的细胞抑制率为4.2%,0.25 g/L何首乌生品对肝癌细胞HepG2作用72 h后的细胞抑制率为-11.1%(负值表示促进细胞生长),即随着何首乌生品浓度增加和作用时间延长,其对肝癌细胞生长的作用由抑制转变为促进.经枯草杆菌发酵后,0.025 g/L何首乌发酵品对肝癌细胞HepG2作用24 h后的细胞抑制率为9.9%,0.25 g/L何首乌发酵品对肝癌细胞HepG2作用72 h后的细胞抑制率为20.9%,即随着何首乌发酵品浓度增加和作用时间延长,其对肝癌细胞HepG2有明显的抗增殖效果.[结论]枯草杆菌发酵可降低何首乌的毒性,增强其对肝癌细胞HepG2的抗增殖作用,表明使用枯草杆菌发酵何首乌的炮制方法是一种安全有效的炮制减毒方法,对开发相应何首乌炮制品有重要意义.  相似文献   

抗真菌枯草杆菌紫外突变株的生物学特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

谢和  赵芹 《山地农业生物学报》1998,17(5):293-297

从烤烟叶上分离到一株具有抗真菌能力的枯草芽孢杆菌Ｖ１Ｊ菌株,初步试验表明,该菌株对防止烟叶雾变有一定的效果。为进一步提高Ｖ１Ｊ的抗真菌活性,经过紫外诱变获得了抗真菌活性稳定高于亲本的突变株ＺＸ３。对ＺＸ３的生物学特性和抗菌谱研究的结果表明,ＺＸ３的最适生长条件是３０℃,ＰＨ７．０,适宜的通气量和３６ｈ的培养时间。该菌对几种的真菌引起烟叶霉变的几种霉菌都有较强的抑制作用。  相似文献   

青鳞鱼HAP的试制   总被引：9，自引：0，他引：9  

邓尚贵  章超桦 《湛江海洋大学学报》1996,16(2):58-61

应用正交试验优选枯草杆菌中性蛋白酶和胃蛋白酶对青鳞鱼蛋白质的水解条件。结果表明：（１）枯草杆菌中性蛋白酶的最适条件为ｐＨ７．０、温度５０℃、时间３ｈ、酶浓度１００００μ／１００ｍｌ；（２）胃蛋白酶的最适条件为ｐＨ３．５、时间２．０ｈ、温度４０℃、酶浓度３００μ／１００ｍｌ；（３）以去内脏青鳞鱼为原料进行双酶水解，蛋白质水解度可达８３．８％。水解液经脱臭浓缩可制得ａ－氨基氮≥１．５ｇ／１００ｍｌ的Ｈ  相似文献   

水稻白叶枯病菌拮抗细菌B56菌株的拮抗活性研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

阮红  陈卫良 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》1999,25(6):573-577

B56 菌株经30 ℃振荡培养去菌体,其上清液经2 m ol/L 硫酸铵沉淀获得对水稻白叶枯病菌有拮抗活性的初提液。该初提液具有耐热性,经一定强度热处理后仍保持强的抑菌能力;抑菌效果在pH3～9 之间无明显差异;用胰蛋白酶、蛋白酶K 等处理后拮抗活性无明显变化。利用PhenylSepharose CL-4B疏水色谱柱和DEAE-Sephacel阴离子交换柱分离B56 菌株初提液, 得到一个具有拮抗活性的洗脱峰。该洗脱峰经SDS-PAGE检测发现具有一条分子量约为36 kD 的蛋白带。质粒提取和检测发现B56菌株存在一个稳定的内源质粒。  相似文献   

枯草杆菌蛋白酶促大豆分离蛋白聚集:蛋白质和酶浓度以及热处理的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

于泓鹏  唐传核  曾庆孝  杨晓泉 《云南农业大学学报(自然科学版)》2006,21(2):142-149

 研究了大豆分离蛋白的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集行为。加入枯草杆菌蛋白酶后,大豆蛋白分离物被迅速降解为分子量小于6.5kDa小分子组分,这些组分相互作用形成大的聚集物。水解液的浊度变化趋势呈S型,底物浓度大于3.2％(酶浓度为750U/mL)时蛋白质的浓度对聚集过程的影响更明显,此临界浓度主要取决于酶浓度。适当的预热处理有利于酶促聚集。由于聚集物能溶于SDS和尿素,说明非共价键(主要是疏水相互作用、氢键和离子键)对聚集物的形成有特别重要的作用。最后并提出了酶促聚集的机理。  相似文献   

枯草杆菌YLNF基因编码蛋白产物性质的研究     

范军等 《勤云标准版测试》2006,(4)

将枯草杆菌ylnF基因经PCR扩增,酶切后插入表达质粒pET15b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,金属螯合亲和层析一步纯化,酶活性测定。结果表明:ylnF基因编码产物是依赖于NAD 的前咕啉-2氧化酶,一个西罗血红素生物合成末端的酶。SDS-PAGE显示YlnF亚基分子量约22kD,全酶分子量约25kD,显示酶为单体酶。将Asp102定点突变Ala102,酶活丧失,表明Asp102在催化中起重要作用。  相似文献   

枯草杆菌脂肪酶固定化与酶学特性的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

李景全  周飞  张海黎  陈芳  高剑峰 《江苏农业科学》2011,39(3)

以枯草杆菌突变菌株所分泌的脂肪酶为研究对象,以人造沸石为载体,以戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法固定脂肪酶,对固定条件和酶学特性进行了分析.结果表明:固定过程中交联剂最适浓度为3%,固定化酶最适反应温度为40℃,比游离酶高5℃,游离酶和固定化酶最适pH值均为8.0.固定化酶在最适温度下保温100 min后几乎没有酶活损失,重复反应5个批次后,酶活仍保留70%,说明采用该方法固定的脂肪酶具有较好的热稳定性和操作稳定性.  相似文献   

球孢白僵菌CDEP2基因原核表达、蛋白纯化及多克隆抗血清制备     

曾智  王梅  肖虎松  钟日超 《广东农业科学》2013,40(16):131-133

类枯草杆菌蛋白酶是昆虫致病真菌重要的毒力因子,利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因.将其与质粒pET28a连接,构建重组原核表达载体pET28-CDEP2,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测His-CDEP2融合蛋白以包涵体方式大量表达并对其进行纯化.用SDS-PAGE分离纯化的CDEP2蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗血清.Western blotting免疫印迹检测分析表明,该抗血清对CDEP2蛋白有特异性识别能力,可用于对CDEP2蛋白功能的进一步研究.  相似文献   

产纳豆激酶之菌种的分离与培养     

谢秋玲 《中南林业科技大学学报(自然科学版)》1999,(4)

纳豆激酶（Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ）是从日本传统食品纳豆中提取出来的一种具有溶血栓功能的酶．从市售纳豆中分离出一株能产ＮＫ的菌株，经鉴定为枯草芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ，其液体培养生长曲线呈Ｓ形，６～４８ ｈ 为指数生长期，４８～９６ ｈ 为稳定生长期；产酶高峰期为稳定生长前期；大豆渣、豆浆、大豆蛋白胨及胰蛋白胨４ 种氮源中以大豆蛋白胨的产酶量最高，最高产酶量为６１０．７ 尿激酶单位／ｍ Ｌ 发酵液．  相似文献