猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化     

牛康  徐璐  张乾义  夏应菊  朱元源  邹兴启  李翠  赵启祖  王琴 《中国兽医杂志》2019,(2):31-35,38,I0004

采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件。将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting 鉴定E^rns 蛋白的反应性,并采用间接ELISA 方法对其应用进行了初步探索。结果显示,获得了重组杆状病毒rBac-E^rns,经Western Blotting 和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和E^rns 单抗发生特异性反应。纯化后的E^rns 蛋白纯度较好,浓度为0. 2 mg/ mL,经Western Blotting 方法鉴定证明,纯化后的蛋白与E^rns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA 方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清。表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒E^rns蛋白,纯化后的E^rns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于E^rns 蛋白的结构和生物学功能研究。  相似文献   

昆虫杆状病毒表达系统中重组蛋白质的降解及其对策   总被引：2，自引：0，他引：2  

吴小锋  曹翠平  鲁兴萌 《蚕业科学》2005,31(4):382-388

昆虫杆状病毒基因表达系统是目前比较高效的真核表达系统之一,但重组蛋白质的降解成为影响该系统生产效率的一个重要问题。就该系统中蛋白质降解的相关问题及其对应策略进行了探讨。  相似文献   

猪瘟兔化弱毒E2基因重组杆状病毒的构建及抗体制备     

范学政 《中国兽药杂志》2015,49(1):6-9

为制备猪瘟特异性抗体,将猪瘟兔化弱毒E2基因序列修饰后克隆到pFastBac1质粒载体,经转座、转染后构建重组杆状病毒,并用纯化的重组猪瘟E2蛋白免疫大耳白兔制备特异性抗体。实验结果表明成功获得能分泌重组猪瘟E2蛋白的杆状病毒,使用纯化的重组猪瘟E2蛋白制备的猪瘟抗体具有良好的特异性和敏感性,为猪瘟病毒荧光抗体染色液的制备奠定了基础。  相似文献   

猪瘟病毒E2基因在昆虫细胞中的分泌表达及活性检测   总被引：2，自引：0，他引：2  

查云峰  徐兴然  肖昌  余兴龙  涂长春 《畜牧兽医学报》2005,36(10):1100-1105

猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）E0和E2囊膜糖蛋白是CSFV主要保护性抗原蛋白，均能诱导机体产生CSFV的中和抗体，保护机体免受强毒的攻击。尤其是E2糖蛋白，既是人们研究CSFV新型疫苗的主要对象，也是建立CSFV血清学检测方法的首选抗原，同时还是研究CSFV抗原变异的主要区域。鉴于E2基因在CSFV感染、复制和免疫方面的重要作用，因此一直是猪瘟病毒研究的热点。  相似文献   

猪瘟病毒E2基因密码子优化后在昆虫细胞中的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

范学政  徐璐  王琴  赵启祖  宁宜宝  陈锴 《中国兽医杂志》2011,47(5)

将猪瘟病毒E2基因密码子改造后,克隆入pFastBac1质粒载体,经转座、转染后构建重组杆状病毒.并对表达产物进行鉴定分析.结果:E2基因改造后与设计序列一致;成功获得了重组杆状病毒(BAC/SE2M),采用猪瘟E2单抗WH303进行Western-blot和ELISA鉴定,证明:表达的CSFV E2蛋白特异性好,纯化后的E2蛋白,可用于猪瘟抗体检测试剂盒的开发.  相似文献