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Ⅶ型分泌系统(T7SS)是近年来发现的分泌系统,分泌两种胞外蛋白,EsxA基因编码的ESAT6蛋白和EsxB基因编码的CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性,促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能,与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板,克隆到294bp的EsxA基因,将目的序列克隆到pMD18-T载体,经测序,目的序列与无乳链球菌EsxA基因同源率在99%以上。EsxA基因克隆到pET32a载体中,重组载体在28℃、0.5mmol/L IPTG诱导条件下表达量最大,可溶性表达。将纯化的ESAT6蛋白免疫Balb/c鼠,成功制备ESAT6蛋白鼠多克隆抗体,经Western blot,ESAT6蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步进行无乳链球菌ESAT6蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。 相似文献
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随着金葡菌对畜牧业破坏性增加和耐药性增强,人们对研发靶向金葡菌的有效保护性疫苗日趋迫切。为开发出更具免疫保护效力的抗菌疫苗,本研究首次利用Esx A、Esx B联合细菌鞭毛蛋白Flic,即制备出融合蛋白ABF,并在版纳微型猪近交系皮肤创伤模型上做实验验证。实验用版纳微型猪分为4组:对照组、模型组、实验组Ⅰ和实验组Ⅱ。结果发现单独使用Esx B蛋白与对照组微型猪的免疫指标之间差距并不显著,而预先经融合蛋白ABF免疫的微型猪,检测到其外周血免疫因子Ig G总量表达显著上升,即机体体液免疫水平提高,同时融合蛋白ABF可以激活T细胞。此外其脾脏淋巴细胞CD8a、CD3e和IFN-γ阳性率均显著增高,皮肤创伤修复速度加快。总之,本实验研究成果证实融合蛋白ABF可作为潜在有效的金葡菌亚单位疫苗,为防治金葡菌提供新的研究途径。 相似文献
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