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RT-PCR检测和区分猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的基因组核苷酸序列,在S基因(纤突蛋白基因)5′端保守区设计了一对引物P3/P4,该对引物在TGEV扩增跨幅约为2.4kb;而PRCV由于在此区域存在一约0.6kb碱基缺失,扩增跨幅约为1.8kb。用引物P3/P4对TGEV Miller株、Purdue株和PRCV AR310株分别进行RT-PCR,根据RT-PCR扩增片段大小可以直接区分TGEV和PRCV。用引物P3/P4与引物P1/P2作Nested-PCR,提高了该RT-PCR的特异性和敏感性,建立的RT-PCR可为临床上诊断TGEV及调查我国是否存在PRCV感染提供可靠的鉴别手段。 相似文献
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携带猪呼吸道冠状病毒S基因片段的重组腺病毒的构建及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术扩增猪呼吸道冠状病毒(Porcine respiratory coronavirus,PRCV)AR310毒株的S基因主要抗原位点片段,构建了重组腺病毒中间载体pDNR-1r-S1和表达质粒pInt.AV1.SpaT-S1。采用Cre-LoxP同源重组腺病毒系统和共转染技术构建了携带PRCV S基因片段的复制缺陷型重组腺病毒,经目的基因PCR检测和序列测定,结果表明:PRCV S基因片段已正确地插入到腺病毒基因组中;Western blot和间接免疫荧光实验证明目的片段在HEK293细胞中成功地获得了表达;子代重组腺病毒Ad5-PRCVS1的滴度为7×107 TCID50/mL。携带PRCV S基因片段重组腺病毒的构建为PRCV和TGEV重组腺病毒新型疫苗的研究奠定了基础。 相似文献
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Porcine respiratory coronavirus (PRCV), a spike (S) gene natural deletion mutant of transmissible gastroenteritis virus (TGEV), causes porcine respiratory disease complex. Research advances on porcine respiratory coronavirus were reviewed from four aspects of biological character, the model fimction for SARS-CoV research, contribution of the immunity to PRCV to protection against TGEV challenge exposure and other etiological significance 相似文献
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猪呼吸道冠状病毒S1基因的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
以猪呼吸道冠状病毒(PRCV)AR310毒株为研究对象,观察PRCV在两种不同细胞中的生长繁殖情况,在猪肾原代细胞中生长良好,在PK15细胞中未见生长。参考GenBbank中已发表的基因序列,设计和合成一对引物,通过RT-PCR扩增出PRCVAR310株的S1基因,克隆到pMD18-T载体中并测序。结果表明与PRCVDQ811787核苷酸同源性为100%,与M94096、M94097的同源性分别为95.2%和95.0%;氨基酸序列分析表明,试验测序的PRCVS1基因氨基酸序列与Genebank中DQ811787同源性为100%,与M94096、M94097的同源性较高分别为95.2%和95.6%。 相似文献
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