马铃薯AP2/ERF转录因子的克隆及植物表达载体构建     

王慧  刘洪  杨奕琦  许思思  熊兴耀  周倩 《分子植物育种》2020,(8):2563-2568

AP2/ERF基因家族转录因子普遍存在于植物中,参与植物体内的各种生物学过程,包括植物的生长发育、生物和非生物胁迫响应等。前期转录组测序的结果发现马铃薯‘加湘1号’一个AP2/ERF家族基因(PGSC0003DMG400012154)在接种晚疫病菌(Phytophthora infestans)24 h后被显著激活。从接种P.infestans 24 h的‘加湘1号’的总RNA中通过RT-PCR获得了该基因CDS序列为885 bp,BLAST分析显示该基因编码一个295个氨基酸残基的蛋白,并且含有1个AP2/ERF结构域,是AP2/ERF转录因子家族中的ERF亚家族的一员。本研究将该基因与XcmⅠ酶切的表达载体pCXSN连接,转化大肠杆菌,通过测序挑选插入正确克隆酶切验证,并成功转化农杆菌。本研究结果为进一步研究该基因的功能提供了帮助。  相似文献   

直干桉、蓝桉无性系多点测定的初步分析     

李淡清  赵兴贵  梁学源  李忠文  李裕民 《西部林业科学》1996,(3)

经方差分析后发现，３个试验点的直干桉、蓝桉无性测定林在１９９４年７月以前造的，其处理间的生长差异显著或极显著，直干桉的生长差异比蓝桉更大。将造林时的苗高作协方差分析，用回归系数调整树高后，大部分无性系的树高都超过对照。对无性系与环境的交互作用初步结果的分析表明，多数地点、地点ｘ无性系的差异显著。以实测值（并非调整值）为难，选出了材积超过对照２５％的直干桉无性系７个，蓝桉无性系６个，最好无性系的材积分别为对照的２８８％和２５６％。  相似文献   

马尾松基因库无性系花期观察分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

曹汉洋  徐立安  陈家东  刘大林  林永清  胡春源 《福建林业科技》1996,(Z1)

在福建省沙县官庄林场石景山工区进行马尾松基因库无性系开花习性、花量、花期的观察。观察结果表明：不同无性系着生球花量的差异显著，始花期也有明显的差异，但也存在一定的同步性，大部分无性系雌花开放时间比雄花早４─９天。  相似文献   

捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

杜爱芳  李孝军  侯玉慧  王素华 《畜牧兽医学报》2005,36(4):387-390

参照已发表的捻转血矛线虫H11蛋白基因序列设计引物，以H．contortuss ZJ株的总RNA为模板，进行RT—PCR扩增，成功扩增出H11基因。将PCR产物与pUCm—T载体连接后，转化DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆并测序。序列分析表明，其核苷酸序列与国外报道的H11基因的同源性为99．5％。编码氨基酸序列具有氨基肽酶的保守序列，推测可使虫体不能获得所必需的氨基酸而导致死亡。  相似文献   

一个马铃薯Y病毒山东分离物的分离与鉴定   总被引：4，自引：1，他引：4  

王秀芳  朱常香  温孚江  竺晓平  郭兴启 《植物病理学报》2003,33(3):203-208

 从具有典型花叶症状的马铃薯叶片中分离到马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)(本文称PVY-SD-TA分离物),扩繁后,提纯病毒,电镜下可观察到700~900 nm×11 nm的病毒粒体,病组织超薄切片观察可见风轮状的内含体结构,寄主反应特性研究表明其能侵染2科13种植物。SDS-PAGE电泳检测病毒编码的外壳蛋白亚基的分子量为33 kDa。以PVY-SD-TA基因组RNA为模板,应用RT-PCR方法和特异引物合成了外壳蛋白基因。对cDNA全序列分析表明,PVY-SD-TA CP基因核苷酸序列与N株系的同源性为96%,与GenBank中登录序列号为AJ390306的O株系分离物的同源性最高,为99%;与国内不同学者报道的PVY中国流行株的同源性分别为96%,97%和98%。通过以上生物学特性和分子水平的研究将PVY-SD-TA鉴定为普通株系(PVY^O株系)。  相似文献   

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

宫强  刘思国  王牟平  王春来  彭永刚  沈国顺 《中国兽医学报》2004,24(4):340-342

以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础  相似文献   

绵羊肺腺瘤病毒NM株前病毒gag基因的克隆与序列分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

刘淑英  马学恩  李景鹏 《畜牧兽医学报》2005,36(1):54-57

参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的全基因序列，设计合成3对引物，对JSRVNM株的gag基因分3段进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳分析，分别呈3条531、888和949 bp的特异条带，将其分别克隆人pMD-18T载体中，进行序列测定并拼接序列，得到完整的gag基因序列。分析结果表明，与南非代表株(基因序列号NC-001494)的gag基因序列比较，核苷酸同源性为89．0%，推导出的氨基酸同源性为90％。与美国代表株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较，核苷酸同源性为86．3％，氨基酸同源性为87％。  相似文献   

蛋鸡OC-116基因的克隆和序列分析     

王淑红  王利  刘长国 《山东家禽》2014,(3):9-13

参考原鸡（G. gallus） OC-116编码基因序列（登录号：NM_204569.1）设计3对引物，特异性地从仙居鸡子宫组织中克隆OC-116编码基因的N端、中段和C端，测序鉴定后通过酶切连接获得家鸡OC-116的全长编码基因。根据本研究的测序结果，初步发现突变概率较高的碱基有：第1233位（A→G）、1336位（C→G）、1358位（T→G）、1391位（T→G）、1491位（T→G）、1754位（G→T）、1841位（T→C）、1843位（C→T）、1983位（C→T）和2057位（T→C）；其中第1358,1754,1841,1983和2057位的碱基突变均为同义突变，第1233、1336、1391、1491和1843位是错义突变。而且突变碱基主要属于T：G颠换类型，其次是T：C转换类型。另外根据同源性分析，家鸡的OC-116编码基因在进化过程中很保守。总之，本研究已经从仙居鸡子宫组织中克隆到OC-116编码基因，为进一步研究该基因的功能奠定基础。  相似文献   

Cloning of Buffalo BMP1 Gene and its Expression Pattern Investigation in Different Tissues     

LEI Xiao-can  CUI Kui-qing  SU Jie  LI Zhi-peng  ZHAO Xian-hong  LIU Qing-you  SHI De-shun 《中国畜牧兽医》2015,42(9):2215-2223

Buffalo BMP1 gene was cloned in the present study, the BMP1 sequence was systemically analysed by bioinformatics techniques, and the expression level of BMP1 gene in different tissues were also assayed with Real-time fluorescence quantitative PCR (QRT-PCR).The results showed that with RT-PCR a 3 195 bp buffalo BMP1 gene was cloned and sequenced, including the whole ORF of 2 967 bp (coding 988 amino acid).The sequence multialigned results showed that buffalo BMP1 gene shared 99%, 96%, 96%, 96% and 95% of similar amino acid sequence with Bos taurus, Sus scrofa, Equus, Homa sapiens and Mus musclus, respectively.It was predicted that buffalo BMP1 protein contained a signal peptide domain, a preregion, a metalloproteinases domain, five complement-Uegf-BMP-1 domain (CUB domain) and two epitheloid growth factor-like domain (EGF-like domain).In addition, we also analyzed the expression level in different tissues through QRT-PCR, the results showed that BMP1 gene mRNA existed in all nine tissues with the most abundant expression in heart, followed by testis, ovary, genital ridge, while with lower amount of bone and other tissues, the minimal expression in liver was observed.  相似文献   

菜薹蛋白精氨酸甲基转移酶基因BrcuPRMT5的克隆及表达分析     

肖旭峰  张祎  吴智明  杨寅桂 《园艺学报》2017,44(6):1181-1188

以‘油青49’和‘油青甜菜薹80’菜薹茎尖为材料,采用RT-PCR和RACE技术克隆获得组蛋白甲基转移酶基因Brcu PRMT5的全长cDNA和gDNA序列。BrcuPRMT5 cDNA序列全长为2 117 bp,其中完整开放阅读框为1 929 bp,编码642个氨基酸,相对分子量为71.55 kD,理论等电点(p I)为5.87;多序列比对结果表明,Brcu PRMT5编码的氨基酸序列含有高等植物PRMT5基因1个高度保守的结构域;系统发育分析结果显示与大白菜、油菜及甘蓝的亲缘关系最近;亚细胞定位软件分析得知,Brcu PRMT5蛋白无跨膜区域,可能定位于线粒体中;对应的gDNA全长为4 151 bp,含有23个外显子和22个内含子,最长的外显子长度为140 bp,内含子的长度范围为50~150 bp。利用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术分析基因的表达,BrcuPRMT5在菜薹不同组织中均有表达,其中在花中表达量最高,叶次之,根中最低;BrcuPRMT5从苗期至完全抽薹开花期的表达量呈现上升趋势。BrcuPRMT5在菜薹花发育过程中可能起一定的调控作用。  相似文献