| 川山茶ISSR-PCR及SSR-PCR优化体系建立及比较 |
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| 引用本文： | 刘家艳,权俊萍,沈薛洁,卢娟芳,田波,陈启航.川山茶ISSR-PCR及SSR-PCR优化体系建立及比较[J].江苏林业科技,2016(5):1-7. |
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| 作者姓名： | 刘家艳 权俊萍 沈薛洁 卢娟芳 田波 陈启航 |
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| 作者单位： | 1. 重庆市南山植物园管理处,重庆,400065;2. 西南大学园艺园林学院,重庆,400716 |
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| 基金项目： | 重庆市科学技术委员会基础前沿研究项目(cstc2014jcyjA1669)，重庆市园林局科技示范项目(园科字2013(9)) |
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| 摘 要： | 以川山茶品种"茶睡莲"为试验材料,以改良CTAB法提取高质量DNA,采用正交设计L16(45),探讨了Mg~(2+)、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA浓度对川山茶ISSR-PCR和SSR-PCR反应体系的影响。建立了相关优化体系:20μL的ISSR-PCR扩增体系中含20 ng模板DNA,2μL10×Buffer,2 mmol/L Mg~(2+),0.15 mmol/L dNTPs,0.6μmol/L引物和1 U TaqDNA聚合酶,扩增退火温度为55℃,35个循环;20μL的SSR-PCR扩增体系中含50 ng模板DNA,2.5 mmol/L Mg~(2+),0.05 mmol/L dNTPs,0.2μmol/L引物和0.5 U TaqDNA聚合酶,最佳退火温度为52℃,最佳循环数为38。应用该优化体系,分别用27个川山茶品种DNA进行了ISSR-PCR扩增和SSR-PCR扩增,结果显示,建立的优化体系具有较高稳定性。
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| 关 键 词： | 川山茶 ISSR-PCR SSR-PCR 引物 退火温度 TaqDNA聚合酶 正交设计 优化体系 |
Optimization of Sichuan Camellia ISSR-PCR and SSR-PCR reaction systems |
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