| 鲢三、四核苷酸重复微卫星标记的筛选及其特征分析 |
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| 引用本文： | 谭照君,张天奇,鲁翠云,李超,孙效文.鲢三、四核苷酸重复微卫星标记的筛选及其特征分析[J].上海水产大学学报,2011(3). |
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| 作者姓名： | 谭照君 张天奇 鲁翠云 李超 孙效文 |
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| 作者单位： | 大连海洋大学生命科学与技术学院;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所;上海海洋大学水产与生命学院; |
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| 基金项目： | 国家973重大基础研究发展计划(2004CB117405) |
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| 摘 要： | 通过磁珠富集法筛选鲢(Hypophthalmichtys molitrix)的三、四核苷酸重复微卫星分子标记。提取鲢血液大片段基因组DNA,用限制性内切酶Sau3AI进行酶切,蔗糖密度梯度离心收集400~900 bp长度的片段,构建鲢全基因组PCR文库,用生物素标记的微卫星探针(TGA)8、(CAG)8以及(AGAT)6进行筛选,磁珠富集含有微卫星序列的DNA片段,获得含有微卫星的单链序列;将这些序列通过PCR扩增,连接pMD 18-T载体,转入感受态大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,获得微卫星文库;再用γ-32P标记的放射性同位素探针进行二次杂交筛选,获得1 758个阳性克隆,选择测序348个克隆序列中,共含有280个微卫星座位,其中完美型167个(59.64%),非完美型28个(10%),混合型85个(30.36%)。Primer 3.0软件设计60对引物,并用珠江水系的野生鲢群体对引物进行多态性位点检测。统计软件分析显示其中22对具有较高的筛选效率和多态性,可作为鲢种质评价等遗传分析的工具。研究亮点:首次利用多碱基(三、四核苷酸重复)探针筛选出微卫星分子标记结合同位素探针进行两次筛选...
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| 关 键 词： | 鲢 微卫星 三核苷酸和四核苷酸重复序列 |
Development and characteristics of tri-and tetra-nucleotide microsatellites for silver carp(Hypophthalmichtys molitrix) |
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| TAN Zhao-jun,ZHANG Tian-qi,LU Cui-yun,LI Chao,SUN Xiao-wen.Development and characteristics of tri-and tetra-nucleotide microsatellites for silver carp(Hypophthalmichtys molitrix)[J].Journal of Shanghai Fisheries University,2011(3). |
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| Authors: | TAN Zhao-jun ZHANG Tian-qi LU Cui-yun LI Chao SUN Xiao-wen |
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| Institution: | TAN Zhao-jun1,ZHANG Tian-qi1,LU Cui-yun2,3,LI Chao2,SUN Xiao-wen2(1.College of Life Science and Technology,Dalian Ocean University,Dalian 116023,Liaoning,China,2.Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,Heilongjiang,3.College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China) |
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| Abstract: | It was a study to isolate the tri-and tetra-nucleotide repeat microsatellite from sliver Carp(Hypophthalmichtys molitrix) with magnetic beads enriched method.Sliver carp(Hypophthalmichtys molitrix) genomic DNA was extracted from blood and digested with restriction Sau 3A I.The segments of 400-900 bp were collected by centrifugation of sucrose density gradient and then a whole genome PCR library was created.The genomic DNA was hybridized with biotin-labeled microsatellite probes(TGA)8,(CAG)8,(AGAT)8,and the ... |
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| Keywords: | Hypophthalmichtys molitrix microsatellite tri-and tetra-nucleotide microsatellites |
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