| 新城疫病毒核衣壳蛋白基因在大肠埃希菌中的表达、纯化及其活性分析 |
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| 引用本文： | 徐彦召,王青,杭柏林,尚田田,赵志雨,胡建和.新城疫病毒核衣壳蛋白基因在大肠埃希菌中的表达、纯化及其活性分析[J].中国畜牧兽医,2013,40(2):18-22. |
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| 作者姓名： | 徐彦召 王青 杭柏林 尚田田 赵志雨 胡建和 |
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| 作者单位： | 河南科技学院,河南新乡,453003 |
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| 基金项目： | 河南省高等学校青年骨干教师资助计划(2005461) |
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| 摘 要： | 构建新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein, NP)基因的原核表达载体,并将其在宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞中表达。以NDV La Sota株NP基因序列为模板,设计特异性引物,通过PCR扩增获得NP蛋白全长基因片段,定向插入原核表达载体pET-30a,构建重组质粒pET-NDV NP;将构建的重组质粒转化宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,表达出目的蛋白,并采用亲和层析的方法纯化表达蛋白;表达蛋白采用Western blotting方法检测其反应原性。结果显示,成功克隆了新城疫病毒NP基因全长,片段序列1470 bp;构建的pET-NDV NP载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误;转化表达宿主菌后经SDS-PAGE检测结果显示目的基因得到成功表达,且表达蛋白经Ni-NTA镍离子亲和层析法被成功纯化,蛋白质浓度为3 mg/mL;Western blotting检测结果显示表达蛋白具有良好的反应原性。试验结果表明,成功构建了含有新城疫病毒核衣壳蛋白基因的原核表达载体,成功表达、纯化得到了NDV NP蛋白。
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| 关 键 词： | 新城疫病毒 NP蛋白 原核表达 纯化 |
| 收稿时间： | 2012-06-25 |
Prokaryotic Expression and Purification of NDV NPGene in Escherichia coli and its Activity Analysis |
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| XU Yan-zhao
,
WANG Qing
,
HANG Bo-lin
,
SHANG Tian-tian
,
ZHAO Zhi-yu
,
HU Jian-he.Prokaryotic Expression and Purification of NDV NPGene in Escherichia coli and its Activity Analysis[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2013,40(2):18-22. |
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| Authors: | XU Yan-zhao WANG Qing HANG Bo-lin SHANG Tian-tian ZHAO Zhi-yu HU Jian-he |
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| Institution: | Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Newcastle disease virus (NDV) NP protein prokaryotic expression purification |
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