| 猪圆环病毒2型ORF4基因的原核表达及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 王净修,高章照,姜永厚,吴海港,饶品彬,全滟平,徐辉.猪圆环病毒2型ORF4基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J].浙江农业学报,2014(1). |
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| 作者姓名： | 王净修 高章照 姜永厚 吴海港 饶品彬 全滟平 徐辉 |
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| 作者单位： | 浙江理工大学生命科学学院;浙江省动物疫病预防控制中心; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31101831);浙江省自然科学基金(Y3090166) |
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| 摘 要： | 猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,ORF4是PCV2中继ORF1,ORF2,ORF3之后的第四大开放阅读框。本研究以提取的PCV2基因组为模板经PCR扩增获得ORF4基因(386~565 nt),并克隆到pGEX-4T-1表达载体上,构建pGEX-4T-ORF4表达载体。经PCR和测序鉴定后,将重组质粒转化受体菌BL21诱导表达并进行目的蛋白GST-ORF4纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰兔,在免疫期间采血并用间接ELISA对多抗血清进行效价测定。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组质粒成功表达了目的蛋白。ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶12 800以上。Western blot分析表明ORF4融合蛋白具有很好的免疫原性,获得的抗体可以和大肠杆菌表达的GST-ORF4融合蛋白特异性反应。
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| 关 键 词： | 猪圆环病毒型 ORF 原核表达 多克隆抗体 |
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