| 毕赤酵母分泌表达SAMS及表达产物活性分析 |
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| 引用本文： | 王莲哲,张现青,李洋,杨广笑,何光源.毕赤酵母分泌表达SAMS及表达产物活性分析[J].安徽农业科学,2009,37(10):4427-4429. |
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| 作者姓名： | 王莲哲 张现青 李洋 杨广笑 何光源 |
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| 作者单位： | 河南城建学院生物工程系,河南平顶山,467044;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;华中科技大学中英HUST-RRes基因工程与基因组学联合实验室,湖北武汉,430074 |
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| 基金项目： | 国家“973”计划项目(2002CB111302) |
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| 摘 要： | 目的]利用毕赤酵母分泌表达S-腺苷甲硫氨酸合成酶（SAMS）。方法]以酿酒酵母（Saccharomyce cerevisiae）基因组DNA为模板,通过PCR扩增出S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因2（sam2）,构建重组毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9Ks-am2,转化毕赤酵母GS115,以甲醇诱导表达分泌蛋白SAM合成酶,并用HPLC测定重组蛋白的酶活力。结果]经SDS-PAGE鉴定重组蛋白分子量约50kD,比理论值42.5 kD稍大,可能是分泌过程中糖基化等加工造成。体外酶促反应结果显示,伴随甲醇诱导及初步纯化过程的进行,蛋白活力逐步提高,纯化后比活力为61.48 U/mg。结论]该研究首次实现了SAM合成酶的胞外表达,为开发和建立体外酶促法生产SAM工艺奠定了基础。
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| 关 键 词： | SAM 毕赤酵母 pPIC9K 分泌表达 |
Secreted Expression and Biological Assay of SAMS in Pichia pastoris |
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| WANG Lian-zhe et al.Secreted Expression and Biological Assay of SAMS in Pichia pastoris[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2009,37(10):4427-4429. |
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| Authors: | WANG Lian-zhe |
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| Institution: | WANG Lian-zhe et al(Department of Bioengineering,Henan University of Urban Construction,Pingdingshan,Henan 467044) |
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| Abstract: | Objective] The research aimed to study the secreted expression of S-adenosy-L-methionine synthetase(SAMS)in Pichia pastoris.Method] The gene coding SAMS,from the genomic DNA of Saccharomyces cerevisiae,was amplified by PCR and inserted into the secreted expression vector pPIC9K to get recombinant plasmid.The recombinant plasmid pPIC9K-sam2 was integrated into Pichia pastoris GS115 genome by electroporation and induced by methanol.The activity of the recombinant enzyme was measured using high-performance l... |
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| Keywords: | SAM Pichia pastoris pPIC9K Secreted expression |
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