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持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定
引用本文:孔令保,吴晓玉,李昆太,徐波,刘好桔,熊舒珺.持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定[J].江西农业大学学报,2009,31(4).
作者姓名:孔令保  吴晓玉  李昆太  徐波  刘好桔  熊舒珺
作者单位:江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌,330045
基金项目:江西农业大学博士基金项目 
摘    要:HCV NS5B是HCV复制所必需的RNA依赖的RNA聚合酶和抗HCV药物的一个理想靶标,构建持续表达NS5B的肝细胞系将有助于研究HCV在肝细胞的复制机制和抗HCV药物的研发.ScaI酶切含有NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,获得的线性化pcDNA-5B通过脂质体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞,G418筛选转染细胞.阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定,证实获得持续表达NS5B的Bel-7402细胞系.体外复制试验和荧光索酶试验表明:Bel-7402细胞表达的NSSB蛋白有体外和细胞内RNA依赖的PNA聚合酶活性.持续表达有聚合酶活性的HCV NS5B的Bel-7402细胞系的建立为进一步研究NS5B催化的HCV复制机制和NS5B抑制剂的筛选奠定基础.

关 键 词:持续表达  活性

Establishment of the Bel-7402 Lines Constitutively Expressing Enzymatically Active HCV NS5B
KONG Ling-bao,WU Xiao-yu,LI Kun-tai,XU Bo,LIU Hao-ju,XIONG Shu-jun.Establishment of the Bel-7402 Lines Constitutively Expressing Enzymatically Active HCV NS5B[J].Acta Agriculturae Universitis Jiangxiensis,2009,31(4).
Authors:KONG Ling-bao  WU Xiao-yu  LI Kun-tai  XU Bo  LIU Hao-ju  XIONG Shu-jun
Abstract:
Keywords:HCV  NS5B  Bel-7402
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