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| 非洲猪瘟病毒pF317 L在昆虫细胞中的表达及鉴定 | |
| 摘 要： | 为了获得可纯化的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pF317L蛋白并对其进行鉴定,试验采用基因合成的方法获得密码子优化的F317L基因,亚克隆至pFastBacⅠ载体中,构建重组杆状病毒中间转移载体,导入DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭质粒,再转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒;将重组病毒感染sf9细胞,用SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白的表达;镍柱亲和层析纯化获得目的蛋白;对纯化的蛋白质进行磷酸化检测。结果表明:成功构建了重组转座质粒pFastBac-F317L,导入DH10Bac感受态细胞得到重组穿梭质粒rBacmid-F317L,再转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒AcNPV-F317L,重组病毒感染sf9细胞后获得重组蛋白,大小为36 ku,能够与His标签单克隆抗体和ASFV阳性血清发生特异性反应,有磷酸化修饰。说明获得了纯化的ASFV pF317L蛋白,且该蛋白质具有生物活性。 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |