| 鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达和间接ELISA方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 李欢,杨霞,赵军,魏亚鹏,陈陆,王新卫,常洪涛,李永涛,刘红英,王川庆.鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达和间接ELISA方法的建立及初步应用[J].中国兽医学报,2015(1):50-56. |
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| 作者姓名： | 李欢 杨霞 赵军 魏亚鹏 陈陆 王新卫 常洪涛 李永涛 刘红英 王川庆 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31302090) |
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| 摘 要： | 扩增鸡杆菌毒力基因gtxA全长序列,对GtxA蛋白的抗原性进行预测。将gtxA基因的部分抗原表位区所处片段克隆至pGEX-6P-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内表达。重组菌在37℃条件下经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果表明该蛋白高效表达,表达蛋白相对分子质量约为50 000,以可溶性蛋白和包涵体蛋白2种形式存在。Western blotting分析表明,获得的蛋白具有良好的反应原性和特异性。以纯化的GtxA蛋白为包被抗原建立了抗GtxA间接ELISA方法:抗原最佳包被质量为0.403μg/孔,一抗血清的最佳稀释度为1∶160,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2 000,阳性判定标准为血清D450≥0.28。应用建立的检测方法对680份临诊鸡血清进行检测,结果显示河南省不同地区鸡群鸡杆菌感染阳性率为19.06%(129/680)。结果表明,该方法可有效检测鸡杆菌血清抗体。
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| 关 键 词： | 鸡杆菌 GtxA 融合蛋白 间接ELISA 抗体监测 |
Expression of G.anatistoxin GtxA and development of an indirect ELISA for the detection of serum antibody against GtxA in chickens |
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| LI Huan;YANG Xia;ZHAO Jun;WEI Ya-peng;CHEN Lu;WANG Xin-wei;CHANG Hong-tao;LI Yong-tao;LIU Hong-ying;WANG Chuan-qing.Expression of G.anatistoxin GtxA and development of an indirect ELISA for the detection of serum antibody against GtxA in chickens[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2015(1):50-56. |
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| Authors: | LI Huan;YANG Xia;ZHAO Jun;WEI Ya-peng;CHEN Lu;WANG Xin-wei;CHANG Hong-tao;LI Yong-tao;LIU Hong-ying;WANG Chuan-qing |
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| Institution: | LI Huan;YANG Xia;ZHAO Jun;WEI Ya-peng;CHEN Lu;WANG Xin-wei;CHANG Hong-tao;LI Yong-tao;LIU Hong-ying;WANG Chuan-qing;College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University; |
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