| 海南黑山羊MBL2基因的转录调控元件的筛选与分析 |
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| 引用本文： | 王雪梅,翟哲,陈巧玲,吴艳茹,吴昊天,黄惠娴,刘志勇,李崇瑞,满初日嘎,王凤阳,杜丽,陈思.海南黑山羊MBL2基因的转录调控元件的筛选与分析[J].畜牧兽医学报,2022,53(6):1795-1806. |
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| 作者姓名： | 王雪梅 翟哲 陈巧玲 吴艳茹 吴昊天 黄惠娴 刘志勇 李崇瑞 满初日嘎 王凤阳 杜丽 陈思 |
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| 作者单位： | 海南大学动物科技学院 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 海口市动物基因工程重点实验室，海口 570228 |
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| 基金项目： | 海南省自然科学基金项目(2019RC123)；;国家现代农业产业技术体系项目(财政部和农业农村部-CARS38)； |
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| 摘 要： | 甘露聚糖结合凝集素C(mannose binding lectin C，MBL-C)是C型(Ca2+依赖型)凝集素超家族的成员，其作为一种急性期蛋白，具有抗细菌感染的功能，参与机体的天然免疫反应。为鉴定出结合在MBL2基因启动子区(1 009 bp)的重要转录因子，探寻该基因的转录调控机制，本研究选取海南黑山羊MBL2基因的启动子序列1 009 bp，采用DNA重组技术克隆6个转录起始位点上游1 009 bp的启动子5'端侧翼缺失序列，克隆片段经双酶切后连接至pGL3-Basic载体。重组质粒转染至293T细胞中，结合双荧光素酶活性检测系统筛选MBL2基因的核心启动子区域。通过在线生物信息学软件预测山羊MBL2基因的核心启动子区域的转录因子结合位点，利用点突变技术构建转录因子结合位点缺失的载体，转染293T细胞后结合双荧光素酶活性检测系统分析其转录活性。结果表明，海南黑山羊MBL2基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-304~-45 bp范围内，在线软件分析该区域存在RELA、NF-κB2、MZF1等3种转录因子结合位点。双荧光素酶报告分析结果表明，RELA和NF-κB2的结合位点缺失后均使山羊MBL2基因的转录活性极显著下降(P < 0.01)。结果提示，RELA和NF-κB2对山羊MBL2基因的转录活性可能具有重要的正调控作用。该研究为进一步探寻海南黑山羊MBL2基因的功能提供理论依据。
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| 关 键 词： | 海南黑山羊 MBL2基因 转录调控 双荧光素酶 核心启动子 |
| 收稿时间： | 2021-08-23 |
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