| 海带配子体中孢子形成相关蛋白(SRP)基因的克隆及其原核表达 |
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| 引用本文： | 陈晶,王丽丽,石微微,周志刚.海带配子体中孢子形成相关蛋白(SRP)基因的克隆及其原核表达[J].水产学报,2010,34(8):1165-1173. |
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| 作者姓名： | 陈晶 王丽丽 石微微 周志刚 |
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| 作者单位： | 1. 上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室,上海,201306
2. 上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室,上海,201306;上海市高校水产养殖学E-研究院,上海海洋大学水产与生命学院,上海,201306 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30471328,30671627);上海市教育委员会海洋生物学重点学科项目(J50701);教育部水产种质资源发掘与利用省部共建重点实验室资助项目(KFT2008-7) |
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| 摘 要： | 从已构建好的海带雄配子体抑制消减cDNA文库中,通过Southern点杂交及序列分析,发现一未知功能的差异表达基因片段(克隆b9)。首先根据该克隆序列设计基因特异性引物,利用cDNA末端快速扩增技术,自雄配子体中克隆了一条长831 bp的cDNA序列,其中开放阅读框450 bp,5′-非翻译区182 bp,3′-非翻译区199 bp且具有明显的poly(A)尾巴。同样利用PCR方法自雌配子体中克隆了该基因的cDNA序列,它与雄配子体的完全一致。蛋白同源搜索结果显示,该基因编码蛋白与点形念珠藻含有SpoIID/LytB结构域蛋白(SpoIID/LytB domaincontaining protein:一种孢子形成时起作用的蛋白质)具有30%相似性,故暂命名为孢子形成相关蛋白基因(sporulationrelated protein gene,srp)(GenBank登录号:EF490313)。然后构建了srp基因原核表达载体pET-28a-srp,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行表达,获得了分子量大小约19.3 ku的目的蛋白,且表达量与诱导物IPTG的量成正比。通过高效液相色谱-质谱分析证实,重组蛋白的氨基酸序列与推测的目的蛋白一致。最后纯化重组了SRP蛋白并制备其多克隆抗体,利用该抗体并运用Western印迹技术,在海带配子体中证实SRP蛋白的存在。
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| 关 键 词： | 海带 配子体 srp基因 原核表达 高效液相色谱-质谱法 |
| 收稿时间： | 2010/4/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2010/5/30 0:00:00 |
Cloning of srp gene from the gametophytes of Laminaria japonica and its expression in Escherichia coli |
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| WANG Li-li,SHI Wei-wei and ZHOU zhi gang.Cloning of srp gene from the gametophytes of Laminaria japonica and its expression in Escherichia coli[J].Journal of Fisheries of China,2010,34(8):1165-1173. |
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| Authors: | WANG Li-li SHI Wei-wei and ZHOU zhi gang |
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| Institution: | shanhai ocean university and shanhai ocean university |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Laminaria japonica gametophytes srp gene prokaryotic expression high performance liquid chromaytography-mass specrometry(HPLC-MS) |
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