| H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 石建州,李青梅,王彦红,刘肖,李鸽,郭军庆,邓瑞广,张改平.H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立[J].中国畜牧兽医,2019(9). |
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| 作者姓名： | 石建州 李青梅 王彦红 刘肖 李鸽 郭军庆 邓瑞广 张改平 |
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| 作者单位： | 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;河南农业大学;南阳师范学院;扬州大学江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 摘 要： | 本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10~(2.63) TCID_(50)/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H_2O_2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2~(-9)标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。
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