| 滑液支原体GDPD基因的原核表达、酶活性分析及亚细胞定位 |
| |
| 引用本文： | 胡荣斌,邢小勇,武小椿,张阳阳,贺健,张生英,包世俊.滑液支原体GDPD基因的原核表达、酶活性分析及亚细胞定位[J].中国畜牧兽医,2019(8). |
| |
| 作者姓名： | 胡荣斌 邢小勇 武小椿 张阳阳 贺健 张生英 包世俊 |
| |
| 作者单位： | 甘肃农业大学动物医学院 |
| |
| 摘 要： | 为了解滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)甘油磷酸二酯磷酸二酯酶(glycerophosphodoester phosphodiesterase,GDPD)的生物学功能,本试验参照GenBank中MS WVU1853株序列设计特异性引物,应用PCR技术扩增获得MS WVU1853株GDPD基因,在测序及序列分析的基础上将其克隆至pET-28a(+)质粒构建原核表达载体pET-GDPD,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达,纯化表达产物并分析其酶促活性,进而制备其多克隆抗体,应用间接ELISA和Western blotting检测其免疫原性并分析其在MS内的分布。结果表明,MS WVU1853株GDPD基因CDS全长726 bp,编码242个氨基酸,重组蛋白分子质量约为28 ku。酶促活性检测表明,重组蛋白可催化对硝基苯磷酸二钠(pNPP)转化为对硝基苯酚,且其作用的最适pH为9.0,最佳温度为37℃,Pb~(2+)具有较强的抑制作用,而Ca~(2+)对其具有较强的促进作用。间接ELISA及Western blotting检测结果表明,MS GDPD具有良好的免疫原性,可刺激新西兰兔产生高水平的抗体,血清效价高达1∶160 000;亚细胞定位结果表明,MS GDPD在细胞膜和细胞浆内均有分布,但在细胞膜的含量略高于细胞浆。本研究结果为探究MS GDPD生物学功能提供了一定的参考依据。
|
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
