| 牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 林伟东,隋修锟,王召阳,贾红,房立春,王海春,朱良全,鑫婷.牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医,2019(6). |
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| 作者姓名： | 林伟东 隋修锟 王召阳 贾红 房立春 王海春 朱良全 鑫婷 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;比利时列日大学让布鲁农学院分子生物学实验室;中牧实业股份有限公司;中国兽医药品监察所 |
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| 摘 要： | 为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性。以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,并加入饲养层细胞轻轻摇匀分装于96孔培养板,置于37℃、5%CO_2培养箱内培养10 d,通过IFA和间接ELISA筛选阳性细胞株进行亚克隆,制备能分泌针对MarP MAb的杂交瘤细胞株,并通过Western blotting和ELISA检测MAb与重组表达和天然的MarP蛋白的反应性。结果显示,重组表达的MarP具有良好的丝氨酸蛋白酶活性,能够在12 h内将30μg的β-casein酶解完全,DTT能够抑制MarP的酶活性。具有活性的MarP蛋白免疫小鼠后,获得5株针对MarP的MAb,均能够特异性识别重组和牛分枝杆菌天然表达的MarP蛋白的线性表位,而不与大肠杆菌(E.coli)和耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)的蛋白反应。本研究成功制备了MarP蛋白及MAb,为进一步研究MarP的作用底物及其在牛分枝杆菌抗酸胁迫中作用机制提供了必备材料。
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