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| 04斜带石斑鱼干扰素调节因子 1 基因的克隆及其原核表达 | |
| 引用本文： | 尹经逵,史燕,朱新平.04斜带石斑鱼干扰素调节因子 1 基因的克隆及其原核表达[J].中国水产科学,2009,5(5). |
| 作者姓名： | 尹经逵 史燕 朱新平 |
| 作者单位： | 1. 广东海洋大学,水产学院,广东,湛江,524025;中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东,广州,510380 2. 中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东,广州,510380 3. 中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东,广州,510380;广州大学生命科学学院,广东,广州,510006 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金与广东省人民政府联合资助重点基金项目，国家重点基础研究发展计划项目 |
| 摘 要： | 对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的干扰素调节因子1(Interferon regulatory factor 1,IRF-1)基因进行了克隆、测序及原核表达.以PBS做对照,利用polvI:C刺激斜带石斑鱼,然后取其肝脏、头肾、脾脏提取总RNA,随机引物反转录获得cDNA.根据相近物种IRF-1的保守序列设计引物,通过PCR得到了保守片段,通过RACE-PCR获得了斜带石斑鱼IRF-1基因的全长cDNA.基因全长为1 730 hp,完整开放阅读框(ORF)906 bp,编码302个氨基酸,5'非编码区153 bp,3'非编码区671 bp.将斜带石斑鱼ORF与其他物种进行比对发现,与海鳜(Siniperca chuatsi)同源性最高,为85%.将根据斜带石斑鱼IRF-1 ORF推测的氨基酸序列与其他物种进行比对,发现斜带石斑鱼与海鳜同源性为90%,与金头鲷(Sparus aurat)为88%,与乌鳢(Channa argus)为86%,与大菱鲆(Scophthalmus maximus)为82%.利用ORF序列,构建原核重组表达质粒.重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白成功表达,表达蛋白的分子量约55 kD.诱导温度为30℃时,重组蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在. |
| 关 键 词： | 斜带石斑鱼 IRF-1基因 分子克隆 原核表达 |
| 修稿时间： | 2009/10/19 0:00:00 |
Cloning and prokaryotic expression of IRF-1 gene from Epinephelus coioides |
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| YIN Jing-kui,SHI Yan,ZHU Xin-ping.Cloning and prokaryotic expression of IRF-1 gene from Epinephelus coioides[J].Journal of Fishery Sciences of China,2009,5(5). | |
| Authors: | YIN Jing-kui SHI Yan ZHU Xin-ping |
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| Keywords: | |
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