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| SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法检测禽活疫苗中禽网状内皮组织增生症病毒 | |
| 引用本文： | 黄小洁.SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法检测禽活疫苗中禽网状内皮组织增生症病毒[J].中国兽药杂志,2016,50(7):7-12. |
| 作者姓名： | 黄小洁 |
| 作者单位： | 中国兽医药品监察所 |
| 摘 要： | 为快速、准确检测禽活疫苗中的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),根据REV p30基因上的一段保守序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法,并以常规PCR产物为标准品绘制了标准曲线,对方法的特异性、敏感性、重复性、与经典方法的符合率进行了评价。结果表明:扩增产物片段大小为222 bp,与预期片段大小相符,测序结果证实为REV靶序列;标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为1.0,扩增效率为94.2%,溶解温度Tm=(86.0±0.50)℃,无引物二聚体;该方法只从REV阳性样本检出扩增信号,其他病原无扩增信号,特异性好;最低可检测26.97拷贝数的阳性标准品,比常规PCR敏感1000倍;组内变异系数、组间变异系数分别为0.79%~5.36%,1.61%~5.25%。运用建立的实时荧光PCR方法对17批禽用活疫苗进行检测,并与间接免疫荧光法(IFA)进行同步比较试验,结果两者符合率为100%。且实时荧光PCR法更快捷、更方便,结果判定更为直观可用于疫苗中REV污染情况的监测。 |
| 关 键 词： | 网状内皮组织增生症病毒 实时荧光PCR 禽活疫苗 |
| 收稿时间： | 2016/5/28 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/7/12 0:00:00 |
Detection of Avian Reticuloendotheliosis Virus of Avian Live Vaccine by SYBR Green Real-time PCR |
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| Institution: | China Institute of Veterinary Drug Control |
| Abstract: | |
| Keywords: | REV Real-time PCR Avian Live Vaccine |
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