| 猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法的建立与检测 |
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| 引用本文： | 郑兰兰,金 钺,李明凤,等.猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法的建立与检测[J].中国兽医学报,2014(5):690-694. |
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| 作者姓名： | 郑兰兰 金 钺 李明凤 等 |
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| 作者单位： | ;1.河南农业大学牧医工程学院;2.河南省动物性食品安全重点实验室 |
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| 摘 要： | 本研究旨在建立一种能快速、灵敏、同时检测出猪细小病毒与猪伪狂犬病毒的基于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。参照GenBank中登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增PRV gH基因与PPV NS1基因的部分片段。将测序正确的PRV gH基因与PPV NS1基因片段克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明,猪细小病毒与猪伪狂犬病毒荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80.9℃和86.5℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达248拷贝/μL和160拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。本次建立的猪细小病毒与猪伪狂犬病毒荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PPV混合感染的临床病料进行快速诊断。
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| 关 键 词： | 猪细小病毒 猪伪狂犬病毒 SYBR GreenⅠ |
Simultaneous detection of porcine pseudorabies virus and porcine parvovirus by duplex real-time PCR |
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