| 罗非鱼湖病毒微滴式逆转录数字PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 李敏,李永福,黄育浩,陈灼均,莫钻兰,钟群芳,李本旺,张险朋.罗非鱼湖病毒微滴式逆转录数字PCR检测方法的建立[J].南方水产科学,2023(1):75-85. |
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| 作者姓名： | 李敏 李永福 黄育浩 陈灼均 莫钻兰 钟群芳 李本旺 张险朋 |
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| 作者单位： | 东莞市动物疫病预防控制中心 |
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| 摘 要： | 建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的罗非鱼湖病毒反转录微滴式数字PCR (RT-ddPCR)检测方法，可为罗非鱼湖病毒的定量检测提供技术支持。参照NCBI中GenBank登陆的TiLV第3段全基因序列，选择hypothetical protein gene基因作为靶位基因设计合成了1对引物和探针，以TiLV-cDNA为模板，摸索、优化反应方法，建立与实时荧光RTPCR检测方法的线性关系，分析方法的敏感性、特异性、重复性，最后进行临床样品检测。结果显示，当引物、探针浓度分别为500、300 nmol·L-1且退火温度为54.2℃时，建立的TiLV RT-ddPCR扩增反应效率最高、阴阳性微滴分布界限最明显、平均拷贝数较高；敏感性强，检测限低至2拷贝·μL-1，且在1～90 000拷贝·μL-1范围内与实时荧光RT-PCR检测的线性关系较好(R2=0.995 8)；检测变异系数低(4.86%)；与其他5种常见的水生动物疫病病毒鲤浮肿病毒(Carp edema virus, CEV)、锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvi...
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| 关 键 词： | 罗非鱼湖病毒 微滴式逆转录数字PCR 线性关系 特异性 变异系数 |
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