| Achaetomium sp.Xz8甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达及其酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 李文革,石鹏君,卢海强,姚斌,张祺玲,戴良英.Achaetomium sp.Xz8甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达及其酶学性质分析[J].核农学报,2015,29(1):87-94. |
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| 作者姓名： | 李文革 石鹏君 卢海强 姚斌 张祺玲 戴良英 |
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| 作者单位： | 湖南农业大学;湖南省农业科学院;中国农业科学院饲料研究所 |
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| 基金项目： | 国家“863”项目(2012AA022208) |
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| 摘 要： | 甘露聚糖酶作为最主要的半纤维素酶类现已被广泛地应用在饲料、造纸、洗涤剂、食品及石油开采等领域。本研究从高温真菌Achaetomium sp.Xz8菌株中利用兼并引物和Thermal asymmetric interlaced PCR(Tail-PCR)的方法克隆获得一个新的糖苷水解酶5家族的甘露聚糖酶基因(man5Xz8)。基因全长1 239bp,序列分析发现其编码412个氨基酸和1个终止密码子,预测的信号肽序列为N端的20个氨基酸。将成熟蛋白序列克隆到毕赤酵母分泌型表达载体p PIC9中,利用甲醇诱导重组酵母菌表达目的蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白分子量约55.0 k Da。对其酶学性质进行测定,Man5Xz8的最适p H值为5.0,在p H值9.0可以保持40%以上的酶活性,在p H值5.0~9.0具有良好的p H稳定性。最适作用温度为50℃,并对SDS具有较高的耐受性。以角豆胶为底物,Man5Xz8的比活、Km及Vmax值分别为101.6 U·mg-1、4.4 mg·m L-1、128.2μmol·min-1·mg-1。因此,Man5Xz8为后期研究甘露聚糖酶的工业应用和酸碱催化机制提供了良好的材料。
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| 关 键 词： | Achaetomium sp.Xz8 甘露聚糖酶 克隆 毕赤酵母 酶学性质 |
Expression and Characterization of a Novel Mannanse From Achaetomium sp.Xz8 in Pichia pastoris |
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| LI Wenge;SHI Pengjun;LU Haiqiang;YAO Bin;ZHANG Qiling;DAI Liangying.Expression and Characterization of a Novel Mannanse From Achaetomium sp.Xz8 in Pichia pastoris[J].Acta Agriculturae Nucleatae Sinica,2015,29(1):87-94. |
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| Authors: | LI Wenge;SHI Pengjun;LU Haiqiang;YAO Bin;ZHANG Qiling;DAI Liangying |
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| Institution: | LI Wenge;SHI Pengjun;LU Haiqiang;YAO Bin;ZHANG Qiling;DAI Liangying;Hunan Agricultural University;Hunan Institute of Nuclear Agricultural Sciences and Space-induced Breeding;Feed Research Institute Chinese Acedemy of Agricultural Sciences; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Achaetomium sp Xz8 mannanse cloning Pichia pastoris enzyme properties |
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