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| 长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达 | |
| 引用本文： | 王路,刘光远,谢俊仁,龚真莉,田占成,柴慧萍,贾宁.长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达[J].中国兽医学报,2009,29(8). |
| 作者姓名： | 王路 刘光远 谢俊仁 龚真莉 田占成 柴慧萍 贾宁 |
| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省兽医寄生虫学重点实验室,甘肃,兰州,730046 2. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省兽医寄生虫学重点实验室,甘肃,兰州,730046 3. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070 |
| 基金项目： | 国家科技基础条件平台项目，国家"863"计划资助项目，甘肃省自然科学基金资助项目 |
| 摘 要： | 根据GenBank中的长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制荆(Haemaphysalislongicornis serine proteinase inhibitor-2,HLS2)基因序列设计特异性引物,以长角血蜱饥饿成蜱总RNA为模板,经RT-PCR扩增出1164 bp的HLS2DNA片段.将其与pET-30a载体连接,构建pET-30a-HLS2表达载体,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆,经双酶切鉴定及测序分析后转化到E.coli BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析.优化表达条件后纯化融合蛋白,用Western blotting鉴定其抗原性.结果表明,获得的HLS2 DNA片段与GenBank中的HLS2(序列号AB162827)序列的同源性为98%.构建的pET-30a-HLS2表达载体在大肠杆菌中表达了约为47 000的HLS2融合蛋白,主要以包涵体形式存在,IPTG终浓度为1.0 mmol/L、28℃诱导7 h后融合蛋白的表达量最高.Western blotting显示该融合蛋白可与兔抗长角血蜱阳性血清反应. |
| 关 键 词： | 长角血蜱 丝氨酸蛋白酶抑制剂-2 原核表达 |
Prokaryotic expression of serpin-2 gene from Haemaphysalis longicornis |
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| WANG Lu,LIU Guang-yuan,XIE Jun-ren,GONG Zhen-li,TIAN Zhan-cheng,CHAI Hui-ping,JIA Ning.Prokaryotic expression of serpin-2 gene from Haemaphysalis longicornis[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2009,29(8). | |
| Authors: | WANG Lu LIU Guang-yuan XIE Jun-ren GONG Zhen-li TIAN Zhan-cheng CHAI Hui-ping JIA Ning |
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