| 胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测 |
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| 引用本文： | 赵晓民,张晓光,吴淑华.胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2008,36(9):17-21. |
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| 作者姓名： | 赵晓民 张晓光 吴淑华 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物医学院,陕西,杨凌,712100
2. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京,100052 |
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| 摘 要： | 【目的】在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肽β4(thymosinβ4,Tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定。【方法】将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用PCR两步法扩增得到Tβ4基因。将Tβ4基因片段克隆至pTXB1载体的NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,将重组质粒转化至E.coliBL21 codon plus,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、几丁质(Chitin beads)亲和层析柱纯化Tβ4。然后用MTT法测定Tβ4的免疫活性。【结果】经测序表明获得了序列正确的人胸腺肽β4基因,构建重组质粒pTXB1-Tβ4,经SDS-PAGE电泳分析表明,重组质粒pTXB1-Tβ4在E.coliBL21 codon plus中高效表达,表达量为30%。将表达产物用几丁质亲和层析柱纯化,获得较纯的Tβ4。MTT检测表明,Tβ4有促进淋巴细胞增殖的活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。【结论】获得高效表达的、高纯度的、有生物活性的重组Tβ4,它可促进淋巴细胞的分化、增殖,具有免疫活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。
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| 关 键 词： | 人胸腺肽β4 基因表达 MTT 活性检测 |
| 收稿时间： | 2007/9/30 0:00:00 |
Cloning and expression in E. coli and biological activity testing of human thymosin β4 |
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| ZHAO Xiao-min,ZHANG Xiao-guang,WU Shu-hua,TONG De-wen.Cloning and expression in E. coli and biological activity testing of human thymosin β4[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2008,36(9):17-21. |
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| Authors: | ZHAO Xiao-min ZHANG Xiao-guang WU Shu-hua TONG De-wen |
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| Institution: | 1 (1 College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China;2 Institute for Viral Disease Control and Prevention,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Beijing 100052,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | MTT |
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